毒性体外代谢分析

检测项目

代谢稳定性评估：测定化合物在肝微粒体或肝细胞孵育体系中的半衰期或清除率，预测其在体内的代谢速率。

代谢产物鉴定：利用高分辨质谱等技术，鉴定化合物经代谢酶作用后生成的主要和次要代谢产物结构。

CYP450酶表型分析：确定负责化合物代谢的主要细胞色素P450同工酶亚型，如CYP3A4、CYP2D6等。

代谢酶抑制试验：评估待测化合物对特定CYP450同工酶活性的抑制作用，预测潜在的药物-药物相互作用风险。

代谢酶诱导试验：研究化合物对CYP450酶或药物转运体mRNA及蛋白表达的诱导作用。

血浆蛋白结合率测定：分析化合物与血浆蛋白的结合程度，这影响其游离浓度及代谢清除。

跨膜转运研究：评估化合物是否为外排转运体（如P-gp、BCRP）的底物或抑制剂。

反应性代谢物筛查：检测代谢过程中是否生成可与蛋白质或DNA共价结合的活性中间体，评估潜在毒性。

代谢种属差异比较：比较化合物在不同种属（人、大鼠、犬等）肝代谢体系中的差异，为临床前到临床转化提供依据。

代谢动力学参数计算：通过体外数据计算固有清除率等参数，并借助体外-体内外推模型预测体内药代动力学行为。

检测范围

小分子化学药物：新药研发候选化合物，评估其代谢特性、稳定性和相互作用潜力。

中药活性成分：研究天然产物单体或提取物在肝代谢系统中的转化规律及稳定性。

农药与兽药：评估其在生物体内的代谢途径、残留及毒性代谢物生成情况。

食品添加剂：研究添加剂在模拟人体代谢环境下的转化产物及安全性。

环境污染物：如多环芳烃、持久性有机污染物等，分析其在生物体内的代谢活化或解毒过程。

化妆品原料：评估其经皮吸收后可能的代谢转化及潜在致敏、毒性风险。

化工中间体：对工业用化学品进行毒理学评价，研究其代谢命运。

候选药物代谢物：对在体内发现的代谢产物进行单独研究，确认其活性或毒性。

非法药物与滥用物质：鉴定其代谢标志物，为法医毒理学分析提供依据。

生物技术产物：部分肽类或拟肽类药物的体外代谢行为研究。

检测方法

肝微粒体温孵法：将化合物与肝微粒体、辅因子NADPH在缓冲液中孵育，是最经典的体外代谢研究模型。

肝细胞孵育法：使用原代肝细胞或肝细胞系，包含完整的细胞结构和酶系，更接近体内生理环境。

重组CYP450酶法：使用表达单一特定CYP同工酶的重组微粒体，用于精确的酶表型分析和抑制研究。

肝S9组分孵育法：使用包含微粒体和胞液酶的肝S9组分，可研究涉及II相代谢反应的代谢途径。

Caco-2细胞模型：用于研究化合物的肠道吸收和外排转运体介导的相互作用。

质谱联用技术：LC-MS/MS或HRMS是代谢产物鉴定和定量分析的核心技术平台。

荧光探针底物法：使用特异性荧光探针底物，通过检测荧光产物来快速评估CYP450酶的抑制或诱导活性。

谷胱甘肽捕获实验：在孵育体系中加入谷胱甘肽，用于捕获并检测反应性亲电代谢中间体。

超滤法/平衡透析法：常用于测定化合物与血浆蛋白或组织蛋白的结合率。

放射性同位素标记法：使用放射性标记的化合物，便于追踪质量平衡和进行代谢产物谱的全面分析。

检测仪器设备

液相色谱-串联质谱联用仪：进行代谢产物分离、鉴定与定量分析的核心高灵敏度设备。

高分辨质谱仪：如Q-TOF或Orbitrap，用于精确测定代谢产物的分子量并推测其元素组成和结构。

恒温振荡培养箱：为体外代谢孵育反应提供恒温及温和混匀的实验环境。

超高效液相色谱仪：实现代谢产物快速、高效的色谱分离。

多功能酶标仪：用于进行基于荧光或吸光度的快速酶活性测定（如CYP抑制实验）。

低温高速离心机：用于制备肝微粒体、S9组分或分离孵育反应后的样品。

细胞培养箱：为原代肝细胞或细胞系模型的培养提供恒定的温度、湿度和CO2浓度。

生物安全柜：为涉及原代细胞或生物样品的操作提供无菌安全环境。

平衡透析装置：用于进行血浆蛋白结合率研究的专用设备。

液体处理工作站：实现孵育实验加样、移液等步骤的自动化，提高通量和重复性。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。