蛋白质纯度分析

检测项目

总蛋白浓度：测定样品中所有蛋白质的总量，是计算纯度的基础参数。

目标蛋白含量：定量分析样品中特定目标蛋白质的绝对或相对数量。

高分子量杂质：检测如蛋白多聚体、聚集物等分子量大于目标蛋白的杂质。

低分子量杂质：检测如蛋白降解片段、多肽等分子量小于目标蛋白的杂质。

宿主细胞蛋白残留：在重组蛋白生产中，检测来自表达宿主（如大肠杆菌、CHO细胞）的非目标蛋白。

核酸残留：检测与蛋白质样品共纯化的DNA或RNA杂质。

内毒素含量：对于医用蛋白，检测革兰氏阴性菌细胞壁成分脂多糖的残留。

电荷异质性：分析因修饰、降解或序列变异导致的蛋白电荷变体。

翻译后修饰分析：评估糖基化、磷酸化、氧化等修饰的分布与程度，影响纯度和活性。

生物活性测定：通过功能实验评估目标蛋白的比活性，是纯度的重要功能性指标。

检测范围

重组治疗性蛋白：如单克隆抗体、融合蛋白、细胞因子等药物的纯度分析。

酶制剂：工业用或研究用酶，需要高纯度以保证催化效率与特异性。

疫苗抗原：病毒样颗粒、重组亚单位疫苗等蛋白成分的纯度与均一性评估。

诊断试剂用蛋白：用于免疫检测的抗原、抗体，纯度影响检测的特异性和灵敏度。

细胞培养上清液：纯化工艺前的初始样品，进行目标蛋白丰度和杂质谱分析。

层析洗脱峰组分：对纯化过程中各步骤的收集组分进行实时纯度监测。

蛋白结晶样品：用于结构生物学研究的蛋白质，需要极高的纯度和均一性。

食品与饲料添加剂：如乳清蛋白、酶制剂等产品中的蛋白质纯度与安全性检测。

科研级纯化蛋白：实验室规模制备的用于生化、细胞实验的蛋白质样品。

血浆来源蛋白：从血液中分离的白蛋白、免疫球蛋白等，需检测相关杂质。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据分子量分离蛋白质，通过染色条带评估纯度与杂质。

高效液相色谱法：包括反相色谱、离子交换色谱等，基于不同性质分离并定量蛋白组分。

尺寸排阻色谱法：基于流体动力学体积分离蛋白质，主要用于分析聚集体和片段。

毛细管电泳法：包括CE-SDS和cIEF，提供高分辨率的纯度及电荷异质性分析。

紫外-可见分光光度法：通过280nm等特征吸收波长快速测定蛋白浓度，估算纯度。

酶联免疫吸附测定法：特异性定量宿主细胞蛋白、特定杂质或目标蛋白本身。

质谱分析法：提供精确分子量信息，用于鉴定杂质、修饰并定量分析复杂混合物。

静态光散射法：与SEC联用，在线测定绝对分子量，确认聚体与单体。

圆二色谱法：通过二级结构分析间接判断样品均一性及是否发生变性聚集。

生物活性测定法：通过细胞实验、酶促反应等生物学方法评估功能性纯品的效力。

检测仪器设备

SDS-PAGE电泳系统：进行凝胶电泳分离的核心装置，包括电泳槽和电源。

高效液相色谱仪：配备多种检测器（UV， FLD）的HPLC系统，用于各类色谱分析。

紫外-可见分光光度计：用于快速测量蛋白质溶液在特定波长下的吸光度。

全自动毛细管电泳仪：实现高通量、自动化的高分辨率CE-SDS和cIEF分析。

质谱仪: 尤其是液相色谱-质谱联用仪，用于蛋白质杂质的精确鉴定与定量。