电泳仪蛋白亚基

检测项目

亚基分子量测定：通过标准分子量蛋白Marker对比，精确测定目标蛋白质亚基的表观分子量。

亚基纯度分析：评估经纯化后的蛋白质样品中，目标亚基的纯度及是否存在杂质蛋白。

亚基数目的确定：判断完整蛋白质复合物由多少个不同的亚基组成，以及是否存在重复亚基。

亚基间二硫键分析：通过还原与非还原电泳对比，检测亚基间是否通过二硫键共价连接。

翻译后修饰检测：初步分析亚基的磷酸化、糖基化等修饰情况，通常表现为电泳迁移率的改变。

亚基表达水平比较：在不同样本间（如正常与病变组织）比较特定蛋白质亚基的表达量差异。

蛋白复合物解离分析：研究在变性剂作用下，蛋白质复合物解离成独立亚基的过程与条件。

抗体特异性验证：利用Western Blot验证抗体是否特异性地识别目标蛋白质亚基。

蛋白样品完整性评估：检查样品制备过程中蛋白质是否发生降解，降解会产生额外的条带。

重组蛋白亚基鉴定：对基因工程表达的重组蛋白进行鉴定，确认其亚基大小与预期是否一致。

检测范围

膜蛋白亚基：用于分析细胞膜上离子通道、受体等复杂膜蛋白的组成亚基及其大小。

酶与多酶复合物：检测如丙酮酸脱氢酶复合体等由多种不同功能亚基组装而成的大型酶复合物。

细胞骨架蛋白：分析肌动蛋白、微管蛋白等细胞骨架成分的单体及聚合形式。

抗体轻链与重链：分离和鉴定免疫球蛋白的轻链（L链）和重链（H链）亚基。

核糖体蛋白：研究核糖体的大、小亚基中众多蛋白质组分的组成与分子量。

转录因子复合物：分析参与基因转录调控的蛋白质复合物的亚基构成。

分子伴侣蛋白：检测如Hsp60、Hsp70等伴侣蛋白的同源或异源多聚体形式。

血清白蛋白多聚体：研究血清白蛋白在储存或特定条件下形成的二聚体或多聚体。

病毒衣壳蛋白：鉴定病毒外壳由一种或多种衣壳蛋白亚基重复排列组成的结构。

植物贮藏蛋白：分析大豆球蛋白、麦谷蛋白等植物种子贮藏蛋白的亚基组成与比例。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：最经典的方法，在强变性剂SDS存在下，根据亚基分子量进行分离。

非变性PAGE（Native-PAGE）：在不使用变性剂的条件下分离蛋白质，保持其天然构象和活性，用于分析天然状态下的亚基聚合。

Tris-Tricine SDS-PAGE：一种改进的SDS-PAGE系统，特别适用于分离分子量小于10 kDa的小分子量多肽或蛋白质亚基。

二维凝胶电泳（2-DE）：第一向基于等电点聚焦，第二向基于SDS-PAGE，可极高分辨率地分离复杂样品中的蛋白质亚基。

梯度凝胶电泳：使用浓度梯度凝胶（如4%-20%），可在同一块胶上获得更宽的分子量分离范围和更清晰的条带。

Western Blotting（免疫印迹）

<强>Coomassie Brilliant Blue染色

<强>银染法

<强>荧光染色法

<强>酶联免疫检测法

检测仪器设备