核酸甲基化代谢试验

检测项目

5-甲基胞嘧啶 (5-mC)：检测DNA中最常见的甲基化修饰形式，是评估整体甲基化水平的核心指标。

5-羟甲基胞嘧啶 (5-hmC)：检测5-mC的氧化产物，是DNA主动去甲基化过程的关键中间体，与基因活跃转录相关。

N6-甲基腺嘌呤 (6-mA)：检测在原核生物中常见、真核生物中重新受到关注的DNA修饰，可能参与基因调控。

胞嘧啶核苷酸甲基化比率：定量测定特定基因组区域或全基因组中甲基化胞嘧啶占总胞嘧啶的比例。

甲基化敏感标志物：检测与特定疾病（如癌症）相关的基因启动子区高甲基化或低甲基化模式。

甲基化代谢通路中间体：检测S-腺苷甲硫氨酸（SAM）、S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）等参与甲基供体和代谢的分子水平。

转移酶活性测定：评估DNA甲基转移酶（DNMTs）和去甲基化酶（如TET家族）的催化活性。

单碱基分辨率甲基化图谱：绘制在单个碱基精度上的全基因组或目标区域甲基化状态分布图。

等位基因特异性甲基化：检测来自父母双方的同源染色体上特定基因座的甲基化差异。

线粒体DNA甲基化：检测线粒体基因组中的甲基化修饰，探索其在能量代谢和细胞功能中的作用。

检测范围

人类基因组DNA：涵盖从血液、组织、体液等临床样本中提取的人类基因组DNA的甲基化分析。

循环游离DNA (cfDNA)：针对血液中无细胞状态的DNA片段进行甲基化检测，用于液体活检和无创产前诊断。

植物基因组DNA：应用于农作物遗传育种、表观遗传调控机制及逆境响应研究中的甲基化检测。

微生物基因组DNA：研究细菌、古菌等微生物的表观遗传调控、宿主-微生物相互作用等。

培养细胞系DNA：用于药物筛选、基因功能研究、疾病模型构建等体外实验的细胞甲基化状态分析。

石蜡包埋组织样本：对临床存档的福尔马林固定石蜡包埋组织进行回溯性甲基化生物标志物研究。

亚硫酸氢盐转化后DNA：专门针对经过亚硫酸氢盐处理的DNA，用于区分甲基化和非甲基化胞嘧啶。

特定基因座或区域：聚焦于如肿瘤抑制基因启动子区、印记控制区等具有明确生物学意义的关键区域。

全基因组范围扫描：不预设目标，对样本中所有可能的CpG岛或胞嘧啶修饰位点进行系统性筛查。

RNA甲基化修饰（如m6A）：扩展至信使RNA等核酸分子的甲基化修饰检测，涵盖表观转录组学范畴。

检测方法

亚硫酸氢盐测序 (Bisulfite Sequencing): 金标准方法，利用亚硫酸氢盐将未甲基化的C转化为U，通过测序区分甲基化状态。

焦磷酸测序 (Pyrosequencing): 基于序列合成的定量方法，能精确测定单个CpG位点的甲基化百分比。

甲基化特异性PCR (MSP): 使用针对甲基化和非甲基化序列的特异性引物进行PCR，快速检测特定位点甲基化状态。

高效液相色谱-质谱联用 (HPLC-MS/MS): 通过色谱分离和质谱检测，准确定量全局核酸甲基化水平及代谢物浓度。

酶联免疫吸附测定 (ELISA): 使用特异性抗体捕获含5-mC或5-hmC的DNA，进行快速、高通量的相对定量分析。

微阵列芯片技术 (Methylation Array): 将大量探针固定于芯片，用于同时检测数十万个CpG位点的甲基化水平。

简化代表性亚硫酸氢盐测序 (RRBS): 结合限制性内切酶与亚硫酸氢盐测序，高性价比地富集CpG密集区域进行测序分析。

全基因组亚硫酸氢盐测序 (WGBS): 提供单碱基分辨率、全基因组范围的甲基化图谱，是最全面的分析方法。

靶向甲基化测序 (Targeted Bisulfite Seq): 通过探针杂交或PCR富集目标区域后进行深度测序，实现高灵敏度、低成本的目标分析。

电化学检测法: 利用电化学传感器对甲基化DNA进行标记和信号转换，实现快速、便携式检测。

检测仪器设备

新一代测序仪 (NGS): 如Illumina NovaSeq, HiSeq系列，是进行高通量甲基化测序的核心平台。

Sanger测序仪: 用于对亚硫酸氢盐处理后的PCR产物进行直接测序验证或小规模位点分析。

焦磷酸测序仪: 如Qiagen PyroMark Q96/48系列，专门用于基于焦磷酸测序原理的定量甲基化分析。

实时荧光定量PCR仪 (qPCR): 支持基于探针（如TaqMan）的MSP和高分辨率熔解曲线分析，进行快速定量检测。

高效液相色谱-串联质谱联用仪 (HPLC-MS/MS): 如Agilent, Waters, AB Sciex等品牌系统，用于精确量化核酸修饰及代谢小分子。

微阵列芯片扫描仪: 如Illumina iScan系列，用于读取和成像基于微阵列的甲基化芯片信号。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。