源内裂解干扰排除实验

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2025-12-22  

源内裂解干扰排除实验是分子生物学研究中的关键验证技术,主要用于确认特定核酸片段的来源与完整性。该实验通过严谨的对照设置和特异性检测,有效区分目标片段与可能存在的内源性或外源性污染及非特异性扩增产物,确保后续分析结果的准确性与可靠性。实验过程涉及核酸提取、扩增、电泳及序列分析等多个环节。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

目标片段特异性验证:通过设计特异性引物和探针,结合扩增曲线与溶解曲线分析,确认扩增产物的单一性和特异性,排除非特异性条带或引物二聚体的干扰。

内源性参照基因检测:在相同反应体系中同时扩增一个稳定的内源性参照基因,用于监控核酸提取效率及反应体系的有效性,确保实验结果的可比性。

无模板对照实验:在扩增反应体系中不加入任何模板核酸,用于检测试剂、耗材或操作环境中是否存在核酸污染,是判断假阳性的关键对照。

无逆转录酶对照实验:在反转录PCR流程中,设置不含逆转录酶的反应对照,用于区分经反转录产生的cDNA扩增信号与基因组DNA污染产生的扩增信号。

阳性对照实验:使用已知含有目标序列的标准品作为模板进行平行实验,验证整个检测流程的有效性以及试剂活性的可靠性。

交叉污染评估:通过空间分隔、使用带滤芯吸头、定期清洁工作台面与仪器设备等措施并设置相应对照,评估并防止样本间的交叉污染。

核酸提取效率评估:通过测量核酸浓度、纯度以及完整性,评估提取方法是否能够有效获得高质量的目标核酸,低效率提取可能导致假阴性结果。

抑制剂残留检测:检测核酸样本中是否残留有蛋白质、酚、肝素等PCR抑制剂,这些物质会显著降低扩增效率,需通过稀释或纯化步骤排除其影响。

琼脂糖凝胶电泳分析:对扩增产物进行电泳分离,通过条带大小、亮度及单一性直观判断扩增是否成功,并初步识别非特异性产物或降解情况。

Sanger测序验证:对特异性扩增产物进行直接测序,将获得的序列与目标序列进行比对,从序列水平最终确认扩增产物的正确性,是最高级别的验证手段。

检测范围

临床病原体核酸检测:用于鉴别诊断感染性疾病病原体,如病毒、细菌、真菌的核酸,排除样本中宿主DNA或环境微生物污染造成的假阳性。

转基因作物成分鉴定:应用于食品及农产品中转基因成分的定性与定量检测,确保检测信号来源于特定的外源基因而非内源相似序列或操作污染。

法医物证DNA分析:在法医科学中用于对微量、降解的生物样本进行个体识别和亲缘鉴定,排除其他个体DNA污染对鉴定结果的干扰至关重要。

肿瘤基因突变检测:用于检测肿瘤组织或液体活检样本中的体细胞突变,需要区分真正的低频突变与扩增或测序过程中引入的错误。

基因表达水平研究:在实时荧光定量PCR实验中,准确测量特定基因的mRNA表达量,需排除基因组DNA污染并确保扩增效率的一致性。

细胞系身份认证:通过短串联重复序列分析等方法对培养细胞系进行鉴定,防止细胞系间交叉污染或误判,保证实验材料的准确性。

环境微生物群落分析:对环境样本中的微生物多样性进行研究时,需排除试剂和实验环境中的背景微生物DNA对群落结构分析结果的影响。

食品安全过敏原检测:检测食品中微量的过敏原成分如花生、麸质等的核酸残留,需要高灵敏度的方法并严格防止交叉污染。

物种鉴定与溯源:应用于野生动物保护、进出口检验检疫等领域,通过DNA条形码技术鉴定物种来源,确保结果不受近缘物种或污染物干扰。

基因编辑效果验证:在CRISPR等基因编辑技术中,验证目标位点是否被成功编辑,并排除脱靶效应或非特异性切割产生的背景信号。

检测标准

GB/T 27403-2008 实验室质量控制规范 分子生物学检测

GB/T 37872-2019 转基因植物产品数字PCR检测方法

GB/T 19495.2-2004 转基因产品检测 实验室技术要求

ISO 20395:2019 Biotechnology — Requirements for evaluating the performance of quantification methods for nucleic acid target sequences — qPCR and dPCR

ISO/IEC 17025:2017 General requirements for the competence of testing and calibration laboratories

ASTM E1873-2006 JianCe Guide for Detection of Nucleic Acid Sequences by the Polymerase Chain Reaction Technique

YY/T 1591-2017 人类EGFR基因突变检测试剂盒

SN/T 5334.1-2020 口岸食品病原体分子分型MLVA方法 第1部分:沙门氏菌

检测仪器

实时荧光定量PCR仪:该仪器能够在PCR扩增过程中实时监测荧光信号的变化,用于对靶核酸进行定性和定量分析,并可通过溶解曲线分析判断产物的特异性。

核酸蛋白测定仪:利用紫外吸光度原理快速测量核酸样本的浓度和纯度,评估核酸提取质量并检测是否存在蛋白质或其他污染物残留。

琼脂糖凝胶电泳系统:通过电场作用使核酸片段在琼脂糖凝胶中按分子量大小分离,经染色后可视化观察,用于初步判断扩增产物的有无、大小及特异性。

生物分析仪:采用微流控芯片技术对核酸样本进行自动化电泳分析,提供高灵敏度的核酸片段分布、浓度和完整性信息,尤其适用于微量样本的质量控制。

Sanger测序仪:基于双脱氧链终止法原理进行DNA序列测定,用于对PCR扩增产物进行序列验证,是确认目标片段序列正确性的金标准方法。

超净工作台:提供局部无菌操作环境,通过垂直或水平层流空气防止空气中的微粒和微生物污染样品,是进行无菌核酸操作的基础设备。

高速冷冻离心机用于快速沉降细胞碎片、浓缩核酸或分离不同组分,其冷冻功能可防止实验过程中核酸降解,是核酸提取纯化的关键设备。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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