微量热泳动分析

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2025-12-26  

微量热泳动分析技术通过检测分子在温度梯度场中的迁移速率变化,定量表征生物分子间相互作用的热力学和动力学参数。该技术无需固定样品,可直接在溶液中进行测量,适用于小分子化合物、蛋白质、核酸等各类生物分子的亲和力、化学计量数和结合常数测定。检测过程需控制样品纯度、缓冲液组成和温度等关键参数。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

结合亲和力常数测定:通过分析分子结合前后泳动速率的变化,精确计算解离常数KD值,用于评估分子间相互作用的强弱。

化学计量数确定:依据结合过程中信号幅度与浓度比例关系,确定复合物中结合位点的数量与比例。

热力学参数分析:通过在不同温度下进行测量,获得反应的焓变、熵变和吉布斯自由能等热力学参数。

动力学参数测定:监测结合过程的实时信号变化,计算结合速率常数Kon和解离速率常数Koff。

竞争结合实验:利用已知亲和力的配体与待测分子竞争结合,评估未知样品与靶点的相互作用能力。

表位筛选:通过比较不同抗体或片段与抗原的结合模式,识别抗原上的特异性结合区域。

片段筛选:从化合物库中快速筛选出与靶蛋白具有弱结合能力的小分子片段。

蛋白稳定性评估:通过测量化学变性剂存在下蛋白的泳动行为变化,评估其结构稳定性。

核酸-蛋白相互作用分析:研究转录因子、修复蛋白等与DNA或RNA特定序列的结合特性。

膜蛋白配体筛选:在接近生理环境的去垢剂胶束或纳米盘中,分析膜蛋白与小分子或抗体的相互作用。

聚集倾向性分析:监测样品在高浓度或特定条件下的泳动信号,评估蛋白质或抗体形成聚集体的风险。

检测范围

抗体-抗原相互作用:定量测定单克隆抗体、多克隆抗体与相应抗原之间的亲和力与特异性。

小分子-靶蛋白结合:评估药物先导化合物与酶、受体等疾病相关靶点的结合强度和机制。

蛋白质-蛋白质相互作用:研究信号通路、免疫应答等生命过程中蛋白质复合物的形成与调控。

核酸杂交分析:检测DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双链分子的杂交效率与热稳定性

酶-底物/抑制剂相互作用:表征酶与其天然底物或人工抑制剂的结合常数和动力学过程。

脂质体与蛋白结合:分析膜锚定蛋白、穿膜肽等生物大分子与模型脂质膜的结合行为。

病毒颗粒与受体结合:研究病毒表面蛋白与宿主细胞表面受体之间的吸附与识别过程。

核酸适配体筛选与表征:用于筛选特异性结合靶标的核酸适配体,并验证其亲和力与选择性。

细胞因子与受体结合:定量分析细胞因子家族成员与其跨膜受体或可溶性受体的相互作用参数。

纳米材料-生物分子相互作用:评估纳米颗粒、量子点等纳米材料与蛋白质、DNA等生物分子的非特异性吸附或特异性结合。

检测标准

ISO10993-22:2017:医疗器械生物学评价第22部分:纳米材料指南,涉及材料与生物分子相互作用的表征。

ASTME2533-17:指导使用光谱学技术进行蛋白质构象和稳定性分析的标准指南。

GB/T34805-2017:生物芯片基本术语,包含分子相互作用分析相关术语定义。

ISO13022:2012:含有药用纳米材料的药品质量评价指南,要求对纳米材料-生物分子相互作用进行评估。

GB/T40149-2021:核酸适配体筛选与鉴定技术规范,包含基于溶液相互作用的筛选方法。

检测仪器

微量热泳动仪:核心设备通过红外激光产生局部温度梯度,并利用荧光或紫外吸收信号检测分子泳动变化,用于直接测量溶液中分子相互作用的各项参数。

高灵敏度荧光检测器:配备特定波长激光器与光电倍增管,用于监测带有荧光标记的分子在温度梯度场中的浓度分布变化。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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