多药耐药蛋白功能性抑制试验

检测项目

P-糖蛋白外排功能抑制率测定：评估抑制剂对P-gp外排底物能力的抑制百分比，是衡量抑制剂效力的核心指标。

罗丹明123蓄积实验：通过检测荧光底物罗丹明123在细胞内的蓄积量变化，间接反映P-gp功能活性。

钙黄绿素-AM外排抑制试验：利用非荧光钙黄绿素-AM被细胞内酯酶水解为荧光钙黄绿素后外排受阻的原理，检测功能抑制。

多药耐药相关蛋白1功能抑制：特异性评估针对MRP1蛋白的抑制剂对其外排谷胱甘肽结合物等功能的影响。

乳腺癌耐药蛋白功能抑制：检测抑制剂对BCRP外排米托蒽醌、Hoechst 33342等特异性底物功能的抑制作用。

半数抑制浓度测定：通过剂量-效应曲线计算抑制50% MDR蛋白功能所需的抑制剂浓度，即IC50值。

细胞毒性增敏倍数测定：评估抑制剂与化疗药物联用时，对耐药细胞杀伤作用的增强倍数。

ATP酶活性抑制试验：检测抑制剂对MDR蛋白ATP水解活性的直接影响，区分其为底物型或抑制型调节剂。

膜囊泡中外排转运抑制：使用过表达特定MDR蛋白的膜囊泡，直接测定抑制剂对底物跨膜转运速率的抑制。

长期抑制效应与耐药性逆转评估：考察抑制剂长期作用后，细胞对化疗药物敏感性的持久性改变。

检测范围

肿瘤多药耐药性研究：应用于白血病、乳腺癌、卵巢癌、肺癌等多种肿瘤细胞系及其原代细胞的耐药性评估。

候选化疗增敏剂筛选：用于高通量或低通量筛选能够逆转MDR的新型化合物或天然产物。

已上市MDR抑制剂效力比较：如维拉帕米、环孢素A、他克莫司等不同代次抑制剂的体外效力对比研究。

药物相互作用风险评估：评估新药是否具有抑制肠道、血脑屏障或肝脏中MDR蛋白的潜力，预测临床DDI风险。

中药复方及单体逆转MDR机制研究：探究中药有效成分或复方逆转肿瘤多药耐药的具体作用靶点与功能机制。

基因工程细胞模型验证：在过表达或敲除特定MDR基因的细胞模型上验证抑制剂的特异性与选择性。

临床样本的体外药敏试验：将患者来源的肿瘤细胞进行原代培养，测试联合抑制剂后的个体化化疗方案敏感性。

血脑屏障穿透性预测：通过评估化合物对脑微血管内皮细胞中P-gp的抑制能力，预测其入脑潜能。

药物吸收与分布研究：用于研究药物在肠道吸收、肝胆排泄过程中与MDR蛋白的相互作用。

基础科研与教学实验：作为细胞生物学、药理学和肿瘤学研究中揭示MDR机制的重要教学与实验手段。

检测方法

流式细胞术：最常用的方法，通过检测荧光底物在细胞内的荧光强度变化，快速、定量分析MDR蛋白功能及抑制情况。

荧光显微镜成像法：提供直观的细胞内荧光分布图像，用于定性或半定量观察底物蓄积的形态学变化。

微板读数器荧光检测法：适用于高通量筛选，在96或384孔板中批量检测细胞群体荧光值，自动化程度高。

放射性标记底物外排法：使用如[³H]-长春碱等放射性标记底物，通过液闪计数精确测定外排量，灵敏度高但操作复杂。

膜囊泡转运测定法：从过表达MDR蛋白的细胞中分离膜囊泡，直接测量抑制剂存在下放射性或荧光底物的摄取速率。

ATP消耗测定法：通过检测MDR蛋白水解ATP产生的无机磷或利用生物发光法测定ATP剩余量，评估其酶活抑制。

MTT/CCK-8细胞毒性联用法：将功能抑制试验与细胞活力检测结合，直接评估抑制剂对化疗药物细胞毒性的增敏效果。

实时荧光定量PCR与Western Blot辅助法：在功能试验前后检测MDR蛋白的mRNA和蛋白表达水平，区分功能抑制与表达下调。

高效液相色谱-质谱联用法：精确测定细胞内特定化疗药物（如阿霉素）的浓度变化，直接反映外排功能的抑制效果。

钙离子成像间接评估法：部分MDR调节剂影响细胞内钙离子浓度，可通过钙离子荧光探针间接评估其生物效应。

检测仪器设备

流式细胞仪：核心设备，用于快速、多参数分析成千上万个细胞内荧光底物的含量，是功能检测的金标准仪器。

倒置荧光显微镜：配备CCD相机，用于实时观察和记录活细胞中荧光探针的分布与强度变化。

多功能微孔板读数仪：具备荧光、发光检测功能，可对多孔板进行快速扫描，适用于高通量筛选实验。

细胞培养箱：提供恒定的温度、湿度和CO2环境，用于待测细胞的培养、加药处理及孵育过程。

生物安全柜

超净工作台：为细胞操作、换液、加样等步骤提供无菌环境，防止污染。

低速离心机：用于细胞悬液的收集、洗涤以及膜囊泡制备过程中的离心步骤。

液氮罐与细胞冻存设备

-80℃深低温冰箱：用于长期保存细胞株、试剂及样本。

精密电子天平与pH计

高压蒸汽灭菌器

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。