微生物截留实验

检测项目

完整性测试（起泡点/扩散流）：在实验前后进行，验证滤膜孔径及安装的完整性，确保无缺陷。

细菌挑战菌种选择：选择特定尺寸的微生物（如缺陷短波单胞菌），用于挑战滤膜的截留能力。

挑战菌液浓度测定：精确测定并确认挑战用菌液的初始浓度，通常要求每平方厘米滤膜面积达到10^7 CFU。

挑战菌液存活率与均一性确认：确保挑战过程中使用的菌液是活菌且分布均匀，以保证挑战有效性。

产品抑菌性/杀菌性评估：确认待过滤产品本身不具有抑制或杀死挑战微生物的特性，防止假阳性结果。

滤膜与产品相容性验证：评估过滤过程是否影响滤膜性能或产品质量，确保过滤系统稳定。

压力与流速监控：在整个挑战过程中监控并记录操作压力与流速，确保其在工艺规定范围内。

下游滤出液无菌检查：对过滤后的滤出液进行无菌测试，确认是否有挑战微生物穿透。

上游挑战菌液回收计数：对残留在滤器上游或吸附在膜上的挑战微生物进行回收和计数。

LRV（对数下降值）计算：根据上下游的微生物数量计算对数下降值，定量评价滤膜的截留效能。

检测范围

无菌注射液除菌过滤验证：用于验证最终灭菌不可行的注射剂产品生产中所用除菌过滤器的可靠性。

生物制品原液除菌过滤：在生物技术产品（如单抗、疫苗）的纯化后步骤中，验证对产品进行除菌过滤的工艺。

细胞培养液无菌处理：验证进入生物反应器的培养基、缓冲液等关键物料的无菌保障过滤工艺。

医用气体除菌过滤：评估用于压缩空气、氮气等工艺气体除菌的疏水性滤器的微生物截留能力。

眼用制剂无菌保障：验证滴眼液等无法终端灭菌的眼用制剂生产过程中的除菌过滤步骤。

医疗器械冲洗液过滤：验证医疗器械生产过程中使用的冲洗液或终产品中液体的除菌过滤工艺。

化妆品无菌或防腐产品：用于高端无菌化妆品或强调防腐体系替代产品的生产过程验证。

食品饮料冷除菌工艺：在食品工业中，验证替代热处理的膜过滤冷除菌工艺对微生物的去除效果。

实验室研究级滤膜评价：为新型滤膜材料或结构的研发提供标准化的微生物截留性能评价方法。

工艺变更或滤器更换的再验证：当生产工艺变更或使用不同品牌/型号的滤器时，需重新进行截留实验验证。

检测方法

ASTM F838-15 标准方法：美国材料与试验协会制定的用于测定液体除菌过滤膜细菌截留能力的权威标准方法。

直接挑战法（产品作为载体）：将挑战微生物直接接种到待过滤的实际产品中，进行过滤挑战，是最具代表性的方法。

产品预处理法：先用实际产品润湿和过滤滤膜，再用标准菌悬液进行挑战，适用于可能具有抑菌性的产品。

平行轮次法：使用至少三个独立的生产批次产品或模拟物进行重复实验，以证明结果的一致性和重现性。

最小泡点压力法关联：将微生物截留实验结果与滤膜的最小泡点压力（或扩散流值）建立关联，用于日常监控。

死端过滤挑战模式：挑战溶液在压力下垂直穿透滤膜，是实验室最常用的标准化挑战模式。

切向流过滤挑战模式：模拟某些实际工艺中料液平行于膜表面流动的情况，评估其微生物截留性能。

压力保持法（衰减测试）：一种完整性测试方法，通过监测上游压力的衰减速率来间接评估滤膜性能，常与截留实验关联。

薄膜扩散法：另一种完整性测试方法，测量在低于泡点的压力下气体通过润湿膜孔的扩散流量。

无菌测试培养法：对挑战后的下游滤出液采用薄膜过滤法或直接接种法进行为期不少于14天的无菌培养检查。

检测仪器设备

细菌挑战试验仪（专用夹具）：专门设计用于夹持平板或囊式滤器，并能控制压力和收集下游滤出液的密闭系统。

高压灭菌锅：用于对所有实验用玻璃器皿、培养基、取样瓶及试验仪的可灭菌部件进行灭菌处理。

生物安全柜或超净工作台：提供无菌操作环境，用于菌液制备、接种、取样等关键步骤，防止污染。

恒温培养箱：用于挑战微生物的活化、扩增培养以及实验后样品的无菌培养。

完整性测试仪：用于实验前后对滤器进行自动化的起泡点、扩散流或压力保持测试的精密仪器。

压力调节与测量装置：包括氮气钢瓶、精密压力调节阀和压力表，用于精确控制和监测挑战过程中的压力。

微生物培养与计数设备

薄膜过滤系统（无菌检查用）：由真空泵、过滤杯、滤膜底座等组成，用于对下游滤出液进行无菌测试时的薄膜过滤操作。

pH计与电导率仪：用于监控和调节培养基、缓冲液及挑战溶液的理化参数，确保条件符合要求。

数据记录与管理系统：包括电子天平、温度记录仪以及实验室信息管理系统（LIMS），用于完整、准确地记录所有实验数据。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。