三萜酸生物利用度体外模拟消化实验

检测项目

口腔阶段物理稳定性：评估三萜酸样品在模拟唾液环境中的分散性、聚集状态及初始溶解情况。

胃阶段化学稳定性：检测三萜酸在低pH胃液环境下化学结构的完整性，是否发生降解或异构化。

胃内容物粒径分布：监测经胃相消化后，含三萜酸的食糜颗粒大小变化，反映机械消化与乳化效果。

肠相溶出率与释放动力学：定量测定三萜酸从载体（如植物基质、制剂）中进入肠液的速率和最终总量。

胶束化效率：评估三萜酸在胆盐和磷脂形成的混合胶束中的包载率，这是脂溶性成分吸收的关键步骤。

胰酶与肠道菌群代谢转化：分析三萜酸在胰酶作用下或与结肠阶段模拟菌群共培养后产生的代谢产物。

跨膜转运潜力（Caco-2细胞模型）：利用人结肠腺癌细胞模型评估三萜酸及其代谢物通过肠上皮细胞的表观渗透系数。

抗氧化活性动态变化：监测在整个消化过程中，三萜酸提取物或制剂的抗氧化能力（如DPPH、ABTS清除率）的变化。

生物可及性：计算最终可被肠道吸收的三萜酸分量（通常为肠液可溶部分）占初始总量的百分比。

物理化学性质表征：包括消化前后样品的Zeta电位、表面微观结构（SEM观察）等物化指标的变化。

检测范围

齐墩果酸与熊果酸：作为五环三萜酸的代表，是体外消化研究中最为常见的目标检测化合物。

其他五环三萜酸同系物：如积雪草酸、桦木酸、阿江榄仁酸等具有生物活性的三萜酸单体。

三萜酸复合提取物：来源于灵芝、枇杷叶、柴胡等中药材或功能食品的粗提物或标准化提取物。

三萜酸功能制剂：包括微胶囊、脂质体、纳米乳液、固体分散体等旨在提高生物利用度的递送系统。

模拟口腔液：包含α-淀粉酶、粘蛋白、电解质的混合溶液，模拟口腔初消化环境。

模拟胃液：主要成分为胃蛋白酶、盐酸，pH严格控制在1.0-3.0，模拟胃部强酸环境。

模拟肠液：包含胰酶、胆盐、磷脂的缓冲体系，pH调至6.5-7.5，模拟小肠消化吸收主要场所。

模拟结肠发酵液：包含特定厌氧菌群或酶的培养体系，用于研究结肠微生物对三萜酸的代谢。

Caco-2细胞单层：分化成熟的肠上皮细胞模型，用于预测人体肠道被动与主动转运过程。

消化全过程时间序列样本：涵盖空腹期、口腔期（2-5分钟）、胃期（1-3小时）、肠期（2-4小时）及结肠期（6-48小时）的连续取样点。

检测方法

静态体外模拟消化模型：采用分步、批次处理的实验方法，依次加入消化液，在固定时间点取样，操作相对简单。

动态体外模拟消化系统：使用如DIDGI®、TIM等计算机控制的复杂系统，能动态调节pH、连续灌注消化液、模拟蠕动，更接近生理状态。

超高效液相色谱法：用于准确定量不同消化阶段样品中各种三萜酸单体的含量及其代谢产物。

液相色谱-质谱联用技术：用于鉴定消化过程中产生的未知或微量三萜酸代谢产物，进行结构解析。

透析袋法或超滤法：分离消化液中的可溶部分（<10-20 kDa），用于评估生物可及性（即理论可吸收部分）。

Caco-2细胞转运实验：将消化后的生物可及性部分加至细胞顶侧，定时测定基底侧的三萜酸含量，计算表观渗透系数。

激光粒度分析：用于监测消化过程中样品颗粒或胶束的粒径大小与分布变化。

体外抗氧化活性测定：采用分光光度法测定消化各阶段样品的自由基清除能力、还原力等。

扫描电子显微镜观察：对消化前后的样品进行微观形貌表征，直观观察结构崩解或变化。

统计学分析方法：使用方差分析、动力学模型拟合等对实验数据进行处理，比较不同处理组间的显著性差异。

检测仪器设备

体外模拟消化反应器：包括恒温振荡水浴摇床（用于静态模型）或全自动动态胃肠道模拟设备。

pH计与自动滴定仪：用于精确监测和调节各消化阶段的pH值，动态模型中需集成自动调控模块。

超高效液相色谱仪：配备二极管阵列检测器或荧光检测器，用于三萜酸的高通量、高分离度定量分析。

三重四极杆液质联用仪：用于高灵敏度、高选择性的三萜酸及其代谢产物的定性与定量分析。

激光粒度及Zeta电位分析仪：用于实时测量消化体系中颗粒/胶束的粒径分布和表面电荷。

高速冷冻离心机：用于快速分离消化液中的不溶物、沉淀蛋白或细胞实验中的样品。

厌氧培养工作站：为结肠阶段模拟提供严格的厌氧环境，以进行肠道微生物发酵实验。

Caco-2细胞培养系统

Caco-2细胞培养系统：包括CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜及用于转运实验的Transwell板。

紫外-可见分光光度计：用于进行抗氧化活性测定、蛋白质浓度测定等基于吸光度的分析。

扫描电子显微镜：用于高分辨率观察样品在消化前后的表面微观结构变化。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。