蛋白质纯度检验

检测项目

总蛋白浓度：测定样品中所有蛋白质的总量，是计算比活性和杂质含量的基础。

目标蛋白浓度：特异性测定样品中目的蛋白的含量，通常需要基于其独特性质（如活性、免疫反应性）进行。

高分子量杂质：检测如蛋白聚集体、多聚体等分子量大于目标蛋白的杂质，可能影响产品安全性与效力。

低分子量杂质：检测如降解片段、多肽、宿主细胞蛋白等分子量小于目标蛋白的杂质。

宿主细胞蛋白残留：定量检测生产过程中来自宿主细胞（如大肠杆菌、CHO细胞）的非目标蛋白杂质，关乎产品安全性。

核酸残留：检测与蛋白质共纯化的宿主DNA或RNA残留，是重组蛋白药物的重要质控指标。

内毒素含量：检测细菌内毒素水平，对于注射用治疗性蛋白至关重要。

蛋白质修饰：分析非预期的化学修饰，如氧化、脱酰胺、糖基化变异等，可能影响蛋白稳定性与功能。

电荷异质性：评估因修饰、降解或序列变异导致的电荷变体（如酸性/碱性峰）分布。

生物学活性：通过功能实验测定目标蛋白的特异性活性，是纯度检验的功能性核心指标。

检测范围

重组治疗性蛋白药物：如单克隆抗体、细胞因子、激素等，需满足极高的纯度标准以确保安全有效。

疫苗抗原：纯化后的病毒样颗粒或重组蛋白抗原，需严格控制杂蛋白与核酸残留。

诊断试剂用蛋白：如酶标记物、抗体、抗原，高纯度是保证检测特异性和灵敏度的前提。

科研用重组蛋白：用于结构解析、生化机制研究、细胞实验等，纯度直接影响实验结果的可靠性。

工业酶制剂：在食品、洗涤、纺织等行业应用的酶，需要控制特定杂质以满足行业标准。

蛋白质晶体学样品：用于X射线衍射或冷冻电镜分析的蛋白样品，要求极高的均一性和纯度。

细胞培养上清液：纯化工艺前的粗提样品，进行初步纯度评估以监控表达与收获情况。

层析洗脱组分：纯化过程中各步骤的流出液，用于评估每一步纯化步骤的效率与目标蛋白富集情况。

药物制剂原液与成品：最终配方中的蛋白质产品，需进行放行检验和稳定性监测。

膜蛋白与难溶蛋白：经过特殊处理（如使用去垢剂）溶解的蛋白样品，其纯度检验具有特殊挑战。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据分子量分离蛋白质，通过染色条带评估纯度及检测降解或聚集。

高效液相色谱法：包括反相色谱、疏水相互作用色谱等，基于不同原理分离并定量蛋白质与杂质。

尺寸排阻色谱法：根据流体动力学体积分离蛋白质，是分析聚集体和片段的主要方法。

离子交换色谱法：基于电荷差异分离蛋白质变体，用于分析电荷异质性。

毛细管电泳法：包括CE-SDS、cIEF等模式，具有高分辨率、快速、自动化程度高的优点。

酶联免疫吸附测定法：高灵敏度地定量特定杂质，如宿主细胞蛋白、残留Protein A等。

紫外-可见分光光度法：快速测定蛋白溶液在280nm处的吸光度，用于估算总蛋白浓度。

质谱分析法：提供精确分子量信息，并能鉴定翻译后修饰、序列变异及杂质身份。

动态光散射法：快速评估样品中蛋白质的粒径分布与聚集状态。

生物学活性测定法：基于细胞、生化或结合实验，确认目标蛋白的功能完整性。

检测仪器设备

紫外-可见分光光度计：用于蛋白质浓度的快速初步测定和部分纯化过程的在线监测。

SDS-PAGE电泳系统：包括制胶器、电泳槽和电源，是实验室最常用的纯度初筛工具。

凝胶成像分析系统：对染色后的凝胶进行拍照，并通过软件对条带进行密度扫描和定量分析。

高效液相色谱仪：配备多种检测器（如UV、荧光、示差折光），是进行精密色谱纯度分析的核心设备。

毛细管电泳仪：自动化程度高，所需样品量少，广泛用于电荷变体分析和纯度检查。

质谱仪：特别是液相色谱-质谱联用仪，用于蛋白质分子量确认、杂质鉴定和深度表征。

酶标仪：用于执行ELISA等基于微孔板的活性或杂质含量检测，可实现高通量分析。

动态光散射仪：快速、无损地分析蛋白质溶液的粒径分布与聚集情况。

分析型超速离心机：通过沉降速度或沉降平衡实验，在溶液接近原生状态下分析聚集体和复合物。

生物传感器系统：如表面等离子共振仪，可用于实时分析蛋白质相互作用及活性定量。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。