蛋白酶抑制常数测定

检测项目

抑制常数（Ki）测定：定量表征抑制剂与蛋白酶结合紧密程度的核心参数，反映抑制效力。

半数抑制浓度（IC50）测定：在特定实验条件下，抑制酶活性达50%时所需的抑制剂浓度。

抑制动力学类型鉴定：确定抑制剂属于竞争性、非竞争性、反竞争性或混合性抑制。

底物米氏常数（Km）测定：测定无抑制剂存在时，蛋白酶对特定底物的亲和力，为Ki计算提供基础。

最大反应速度（Vmax）测定：测定酶促反应的最大速率，用于分析抑制剂的动力学影响。

可逆性抑制验证：通过稀释或透析实验，验证抑制剂与蛋白酶的结合是否为可逆过程。

时间依赖性抑制评估：检测抑制效力是否随预孵育时间增加而增强，判断是否为慢结合或不可逆抑制。

pH依赖性测试：考察不同pH条件下抑制常数的变化，探究结合位点的离子化状态。

温度依赖性测试：研究温度对抑制常数的影响，为抑制机制提供热力学参数。

选择性指数计算：比较抑制剂对目标蛋白酶与相关同源蛋白酶的Ki值，评估其选择性。

检测范围

丝氨酸蛋白酶抑制剂：如针对胰蛋白酶、凝血酶、弹性蛋白酶的抑制剂研究。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂：如针对组织蛋白酶、钙蛋白酶、Caspase家族的抑制剂评估。

天冬氨酸蛋白酶抑制剂：如针对HIV蛋白酶、肾素、胃蛋白酶的药物筛选。

金属蛋白酶抑制剂：如针对基质金属蛋白酶、血管紧张素转化酶的抑制剂开发。

苏氨酸蛋白酶抑制剂：如针对蛋白酶体的抑制剂（如硼替佐米）的机制研究。

天然产物提取物：从植物、微生物中提取的具有潜在蛋白酶抑制活性的粗提物或纯化物。

合成小分子化合物库：通过组合化学或理性设计得到的小分子化合物，进行高通量筛选。

多肽及拟肽类抑制剂：基于底物或天然抑制剂结构设计的多肽或类肽分子。

生物大分子抑制剂：如单克隆抗体、适配体、天然抑制蛋白（如抑肽酶）的活性表征。

临床前候选药物：在药物研发阶段，对候选化合物的体外酶抑制活性进行精确量化。

检测方法

连续速率法：通过监测产物生成或底物消耗的初始速率随时间的变化来计算酶活。

终点法：在反应进行一定时间后终止反应，测定累积的产物量来推算酶活性。

荧光共振能量转移法：使用带有荧光供体/受体对的底物，通过荧光变化灵敏检测酶活。

比色法：利用产物或底物在特定波长下的吸光度变化进行检测，如使用生色底物。

发光法：基于化学发光或生物发光原理，具有灵敏度高、背景低的优点。

放射性测定法：使用放射性同位素标记的底物，通过测定释放的放射性产物来定量。

表面等离子共振技术：实时、无标记地监测抑制剂与蛋白酶结合的动力学过程。

等温滴定量热法：直接测量结合过程中释放或吸收的热量，获得热力学参数。

Dixon作图法：通过在不同底物浓度下测定抑制剂浓度对1/v的影响，直接作图求取Ki值。

Lineweaver-Burk双倒数作图法：通过双倒数图直线的交点模式，判断抑制类型并计算Ki。

检测仪器设备

紫外-可见分光光度计：用于基于吸光度变化的比色法和连续速率法检测的核心设备。

多功能酶标仪：可进行吸光度、荧光、发光检测的高通量设备，适合大规模筛选。

荧光光谱仪：提供高灵敏度的荧光强度、偏振或FRET测量，用于精细动力学研究。

化学发光检测仪：专门用于高灵敏度化学发光信号检测的仪器。

液相色谱-质谱联用仪：用于复杂体系中底物或产物的精确分离与定量，验证其他方法结果。

等温滴定量热仪：直接测量生物分子相互作用热效应的专用仪器。

表面等离子共振仪：实时、无标记分析分子间相互作用动力学和亲和力的高端设备。

停流光谱仪

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。