抑制剂选择性试验

检测项目

半数抑制浓度测定：测定抑制剂使特定靶酶或受体活性降低50%所需的浓度，是评估效力的核心参数。

半数最大效应浓度测定：评估抑制剂在功能学实验中产生50%最大抑制效应时的浓度，常用于细胞水平试验。

抑制常数测定：通过动力学分析确定抑制剂与靶点结合的平衡解离常数，反映其固有亲和力。

抑制机制鉴定：判断抑制剂属于竞争性、非竞争性、反竞争性或不可逆抑制类型，指导结构优化。

时间依赖性抑制评估：检测抑制效力是否随预孵育时间增加而增强，用于识别共价或慢结合抑制剂。

可逆性测试：通过稀释或透析实验验证抑制效应是否可逆，区分共价键与非共价键结合。

选择性指数计算：通过比较对主要靶点与相关脱靶靶点的IC50或Ki值，量化计算选择性倍数。

细胞增殖抑制试验：在细胞模型中评估抑制剂对细胞生长的影响，关联靶点抑制与表型效应。

脱靶效应谱分析：系统筛查抑制剂对一大类相关蛋白（如激酶组、GPCR组）的交叉反应性。

代谢稳定性预判：评估抑制剂对主要药物代谢酶（如CYP450）的抑制潜力，预测潜在的药物-药物相互作用。

检测范围

激酶家族：涵盖酪氨酸激酶、丝氨酸/苏氨酸激酶等主要亚类，是肿瘤治疗的重要靶点群。

G蛋白偶联受体家族：针对GPCR超家族成员进行功能拮抗或激动抑制测试，涉及众多疾病领域。

离子通道蛋白：包括电压门控、配体门控离子通道，评估抑制剂对电生理特性的调节作用。

核激素受体：检测化合物对雌激素、雄激素、甲状腺激素等受体的选择性激动或拮抗活性。

表观遗传调控蛋白：涵盖组蛋白去乙酰化酶、甲基转移酶、去甲基化酶等新兴靶点类别。

蛋白酶与肽酶：包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等，如蛋白酶体、凝血因子。

磷酸二酯酶家族：评估对PDE各亚型的选择性，这对心血管、神经疾病药物开发至关重要。

转运体蛋白：检测对神经递质转运体、外排泵等蛋白的抑制活性，影响药物分布与疗效。

结构蛋白与骨架蛋白：针对微管蛋白、肌动蛋白等靶点，常用于抗肿瘤和抗寄生虫药物筛选。

病原体特异性靶点：针对病毒、细菌或寄生虫特有的关键酶或功能蛋白进行选择性抑制测试。

检测方法

放射性配体结合分析法：使用标记的放射性配体竞争性结合实验，直接测定抑制剂与受体的亲和力，金标准方法之一。

荧光共振能量转移法：利用FRET原理构建报告系统，实时、均相检测酶活性的抑制，适用于高通量筛选。

发光法检测：基于萤光素酶或化学发光底物，检测ATP消耗或产物生成，灵敏度高，背景干扰低。

表面等离子共振技术：实时、无标记地监测分子间相互作用动力学，直接获取结合速率与解离速率常数。

等温滴定量热法：通过测量结合过程的热变化，直接获得结合常数、焓变和熵变，提供全面的热力学信息。

细胞热位移分析：基于靶蛋白热稳定性变化，在细胞裂解液或活细胞中直接检测小分子的靶点结合。

高通量质谱筛选法：直接定量检测酶反应底物与产物的质谱信号，无需标记，适用于多种酶类。

微尺度热泳法：利用分子结合前后在温度梯度中运动的变化来测定解离常数，样品消耗量极少。

核磁共振谱法：用于片段筛选和结合位点鉴定，可提供原子水平的结合信息，但通量较低。

细胞成像与高内涵分析：利用荧光标记和自动化显微镜，在单细胞水平多参数分析抑制剂的表型与选择性效应。

检测仪器设备

多功能酶标仪：具备吸光度、荧光、发光、FRET等多种检测模式，是进行体外生化检测的核心平台。

高通量筛选系统：集成自动化液体处理、孵育和检测模块，可实现每天数万次试验的超高通量筛选。

表面等离子共振仪：如Biacore系列，专门用于实时、无标记分析生物分子相互作用动力学。

等温滴定量热仪：精确测量生物分子结合过程中微小的热量变化，用于全面热力学分析。

液相色谱-质谱联用仪：用于基于质谱的活性筛选和代谢物鉴定，提供高特异性和灵敏度的定量数据。

自动化移液工作站：实现纳升至毫升级别的精准、快速液体转移和反应体系构建，保证实验重复性。

细胞成像系统：高内涵分析仪器，可自动对多孔板中的细胞进行荧光成像和定量分析。

实时荧光定量PCR仪：用于检测抑制剂处理后特定基因表达水平的变化，间接评估其对信号通路的影响。

蛋白纯化系统：包括AKTA等层析系统，用于制备高纯度、高活性的重组靶点蛋白，是生化试验的基础。

生物分子相互作用分析仪：如Octet系列，基于生物层干涉技术，实现无标记、实时的结合动力学分析。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。