宿主蛋白残留测定

检测项目

总宿主细胞蛋白：测定样品中所有来源于宿主细胞的蛋白质总量，是评估纯化工艺有效性的核心指标。

特异性宿主蛋白：针对已知具有潜在免疫原性或毒性的特定宿主蛋白进行定量检测。

宿主DNA残留：虽然非蛋白，但常与HCP一同评估，指残留的宿主细胞基因组DNA。

培养基组分蛋白：检测来源于细胞培养基中的蛋白质残留，如牛血清白蛋白。

宿主酶类残留：如宿主细胞分泌的蛋白酶，可能影响产品稳定性。

细胞骨架蛋白：如肌动蛋白、微管蛋白，是宿主细胞的主要结构成分。

分子伴侣蛋白：如热休克蛋白，在细胞内协助蛋白质折叠。

核糖体蛋白：来源于宿主细胞蛋白质合成机器。

膜相关蛋白：如细胞膜或细胞器膜上的整合蛋白。

分泌途径相关蛋白：参与内质网、高尔基体等分泌过程的蛋白质。

检测范围

CHO细胞表达产品：中国仓鼠卵巢细胞系是生产单克隆抗体等重组蛋白最常用的宿主。

HEK293细胞表达产品：人胚胎肾细胞系，常用于表达病毒载体、重组蛋白和疫苗。

大肠杆菌表达产品：原核表达系统，其HCP具有强免疫原性，需严格控制。

酵母表达产品：如毕赤酵母、酿酒酵母，用于生产疫苗和部分治疗性蛋白。

昆虫细胞表达产品：如Sf9、Sf21细胞，用于杆状病毒表达系统。

杂交瘤细胞表达产品：用于生产鼠源或嵌合单克隆抗体。

血液制品：检测生产过程中可能引入的人或动物源宿主蛋白。

疫苗制品：包括病毒疫苗和细菌疫苗，需检测生产细胞基质的蛋白残留。

基因治疗载体：如腺相关病毒、慢病毒载体生产过程中包装细胞的蛋白残留。

细胞治疗产品：评估培养过程中宿主或滋养层细胞的蛋白残留。

检测方法

酶联免疫吸附法：使用抗宿主总蛋白的多克隆抗体进行定量检测的金标准方法，灵敏度高。

Western Blot：用于定性或半定量分析HCP的种类和分子量分布，可识别特异性条带。

二维电泳结合质谱：高分辨率的分析方法，可分离并鉴定上千种个体HCP成分。

基于质谱的靶向定量：如MRM/PRM，可对已知的、高风险的特异性HCP进行精确定量。

基于质谱的非标记定量：无需标记，通过谱图计数或强度对HCP进行相对定量和鉴定。

免疫沉淀-质谱联用：利用抗体富集HCP后进行质谱鉴定，提高低丰度HCP检出率。

毛细管电泳-激光诱导荧光法：具有高分离效率和灵敏度，可用于快速分析。

表面等离子体共振技术：实时、无标记地监测抗体与HCP的相互作用动力学。

微流控芯片免疫分析：集成化、自动化平台，所需样品量少，分析速度快。

电化学发光免疫法：具有宽动态范围和超高灵敏度，适用于极低残留水平的检测。

检测仪器设备

酶标仪：用于ELISA实验的吸光度或荧光、化学发光信号读取的核心设备。

蛋白质电泳系统：包括SDS-PAGE、2D电泳所需的电泳槽、电源和凝胶成像系统。

高分辨率质谱仪：如Q-TOF、Orbitrap系列，是HCP鉴定和深度表征的关键设备。

三重四极杆质谱仪：用于靶向定量方法，如MRM，具有极高的灵敏度和特异性。

高效液相色谱仪：与质谱联用，用于复杂HCP样品的高效分离。

毛细管电泳仪：提供不同于HPLC的分离机制，用于HCP的快速、高效分离分析。

Western Blot成像系统：化学发光或荧光成像仪，用于捕获和定量Western Blot信号。

SPR生物传感器：如Biacore系列，实时无标记分析HCP与抗体的结合特性。

自动化液体处理工作站：实现ELISA等步骤的自动化，提高通量和重复性。

电化学发光检测仪：如Meso Scale Discovery或Roche Cobas e系列仪器，用于高灵敏度ECL检测。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。