双重PCR扩增检测

检测项目

病原微生物共感染检测：同时检测样本中两种不同的病毒或细菌，如甲型流感病毒与乙型流感病毒。

基因突变与野生型鉴别：在同一反应中区分特定基因的突变型和野生型等位基因。

转基因成分筛查：同步检测样品中是否含有两种不同的转基因元件，如CaMV 35S启动子和NOS终止子。

人类遗传病相关基因分型：对与疾病相关的两个不同基因位点进行同步扩增与鉴定。

免疫基因多态性分析：同时分析HLA等免疫相关基因的两个多态性区域。

肿瘤标志物联合检测：从样本中并行扩增两种与特定肿瘤相关的基因标志物。

食品安全病原体检测：在食品样本中同时检测两种食源性致病菌，如沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。

动物疫病诊断：用于诊断动物是否混合感染两种病原，如猪瘟病毒和猪蓝耳病病毒。

植物病害鉴定：同步检测植物病原真菌和细菌，实现快速病害诊断。

法医学个体识别：在一次反应中扩增两个短串联重复序列（STR）位点，用于DNA指纹分析。

检测范围

临床诊断样本：包括血液、血清、血浆、痰液、咽拭子、组织活检样本等。

环境监测样本：涵盖水体、土壤、空气颗粒物等环境样品中的微生物检测。

食品安全样本：包括肉类、乳制品、果蔬、加工食品及其原材料。

农业与畜牧业样本：涵盖作物叶片、种子、动物组织、排泄物及饲料。

法医物证样本：包括血迹、唾液斑、毛发毛囊、骨骼等微量或降解生物检材。

科学研究样本：适用于细胞培养物、质粒、cDNA文库等实验材料。

进出口检验检疫样品：针对口岸截获的动植物产品及其制品进行病原筛查。

药品与生物制品：用于疫苗、血液制品、细胞治疗产品中特定微生物的质控检测。

化妆品原料与成品：检测其中可能污染的特定微生物指标。

考古与古生物学样本：从化石或古代遗骸中同时获取两个目标基因序列信息。

检测方法

引物设计与验证：设计两对特异性引物，确保其退火温度匹配且不产生交叉反应或引物二聚体。

模板DNA/RNA制备：从样本中提取高质量的总核酸，若为RNA病毒则需先进行反转录。

多重PCR反应体系优化：精确调整两对引物的浓度比例、Mg2+浓度及dNTPs用量，以实现均衡扩增。

热循环程序设置：采用优化的退火温度和时间，确保两个目标序列都能高效特异地扩增。

产物同步电泳分析：通过琼脂糖凝胶电泳，根据扩增片段大小不同同时区分两个目标条带。

实时荧光双重PCR：使用两种不同荧光标记的探针（如FAM和VIC），在扩增过程中实时监测两个靶标。

熔解曲线分析：在实时PCR后通过熔解曲线区分特异性产物与非特异性产物或引物二聚体。

毛细管电泳检测：对扩增产物进行高分辨率的毛细管电泳，精确判断片段大小，适用于STR分析。

微流控芯片检测：将PCR反应与产物分析集成于芯片上，实现快速、自动化的双重检测。

结果判读与质量控制：设立阳性对照、阴性对照和内参对照，确保检测结果的准确性和可靠性。

检测仪器设备

普通PCR仪：用于常规的双重PCR扩增反应，提供精确的温度循环控制。

实时荧光定量PCR仪：核心设备，能够进行实时荧光双重PCR，并收集荧光信号进行定量分析。

核酸提取仪：自动化完成样本的核酸纯化过程，保证模板质量与一致性。

电泳系统：包括电源、电泳槽和凝胶成像系统，用于PCR产物的琼脂糖凝胶分离与可视化。

毛细管电泳仪：用于对PCR产物进行高精度片段分析，尤其适用于法医和基因分型领域。

超微量分光光度计/荧光计：用于快速、准确地测定提取的核酸浓度与纯度。

生物安全柜：为样本前处理和核酸提取提供无菌无污染的操作环境，保障人员与样品安全。

高速冷冻离心机：用于样本预处理、核酸沉淀等步骤中的高速离心分离。

涡旋混合器与微量移液器：基础设备，用于样品的混匀以及反应体系的精确配制与分装。

超纯水系统：制备分子生物学实验所需的无核酸酶、无污染的超纯水，是配制所有试剂的基础。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。