免疫印迹验证测试

检测项目

目标蛋白鉴定：验证样本中是否存在特定的目标蛋白质，是免疫印迹最核心的检测目的。

蛋白质分子量确定：通过与预染蛋白Marker对比，估算目标蛋白的表观分子量。

蛋白质表达水平分析：通过信号强度半定量或定量分析，比较不同样本间特定蛋白的表达差异。

蛋白质翻译后修饰检测：利用特异性抗体检测蛋白质的磷酸化、乙酰化、甲基化等修饰状态。

蛋白质剪切体分析：检测蛋白质前体或其活性剪切片段的存在与比例。

多克隆抗体特异性验证：确认新制备或采购的多克隆抗体能否特异性识别目标抗原。

基因沉默或过表达效率验证：在分子生物学实验中，验证siRNA、shRNA或过表达载体对目标蛋白表达的影响。

蛋白质相互作用初步验证：与免疫共沉淀联用，验证潜在的蛋白质相互作用。

疾病生物标志物筛选：在临床或基础研究中，筛选可能与疾病相关的差异表达蛋白。

药物处理效应评估：评估药物、化合物或特定刺激处理后，细胞或组织中目标蛋白的表达变化。

检测范围

细胞裂解液：来自培养的动物细胞、植物细胞或微生物细胞的蛋白质提取物。

组织匀浆液：从动物或植物组织中提取的蛋白质样品，如肿瘤组织、肝脏、脑组织等。

血清或血浆样本：用于检测血液中存在的特定抗原或自身抗体，常见于临床诊断。

重组蛋白：用于抗体特异性验证或作为实验的阳性对照。

细菌或酵母表达产物：检测外源基因在原核或真核微生物中的表达情况。

亚细胞组分：如细胞核、线粒体、细胞膜等分离组分的蛋白质，用于定位研究。

植物总蛋白提取物：适用于农业或植物生物学研究，检测植物中的特定蛋白。

病毒蛋白组分：分析病毒颗粒或病毒感染细胞后产生的特异性蛋白。

脑脊液或其他体液：用于神经性疾病或特定疾病的生物标志物研究。

石蜡包埋或冰冻组织切片提取物：从病理学样本中提取蛋白质进行回顾性研究。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据分子量大小分离蛋白质混合物的核心第一步。

湿式转膜法：将凝胶中分离的蛋白质转移至硝酸纤维素膜或PVDF膜的经典方法。

半干式转膜法：使用更少缓冲液、更快速的电转方法，适用于多数常规蛋白。

膜封闭：使用脱脂奶粉或BSA溶液封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景。

一抗孵育：使用针对目标蛋白的特异性一抗与膜上的蛋白结合。

二抗孵育：使用连接有酶或荧光基团的二抗与一抗结合，用于信号放大与检测。

化学发光法检测：通过酶催化底物产生化学发光信号，并用X光胶片或成像系统捕获。

荧光法检测：使用荧光标记的二抗，通过荧光扫描仪直接成像，可实现多重检测。

显色法检测：使用酶催化底物产生不溶性的有色沉淀进行显色，无需成像仪。

Strip与Reprobe：将膜上的抗体洗脱后，用不同的抗体重新孵育，实现同一张膜检测多个蛋白。

检测仪器设备

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE凝胶电泳，分离蛋白质的核心装置。

电转仪：提供电场，将凝胶中的蛋白质转移至固相支持膜上的关键设备。

摇床：用于孵育和洗涤过程中，使膜与溶液充分接触，保证反应均匀。

化学发光成像系统：高灵敏度地检测和记录化学发光信号，并进行定量分析。

荧光扫描成像仪：用于检测荧光标记二抗发出的特定波长荧光信号。

X光胶片暗盒与洗片机：传统的化学发光信号捕获方式，通过曝光和冲洗胶片获得结果。

精密电子天平：精确称量化学试剂、丙烯酰胺等，保证溶液配制的准确性。

pH计：精确测量和调整电泳缓冲液、转膜缓冲液等关键溶液的pH值。

微波炉或电炉

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。