半抑制浓度定量分析

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2026-03-12  

本检测详细阐述了半抑制浓度(IC50)定量分析的核心技术体系。IC50是评估化合物(如药物、毒素、抑制剂)生物活性的关键参数,指在特定体系中抑制50%目标效应所需的化合物浓度。文章系统性地介绍了IC50定量分析的四大支柱:检测项目、检测范围、主流检测方法及所需的核心仪器设备,为从事药理学、毒理学、生物化学及药物研发的专业人员提供全面的技术参考。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

酶活性抑制率:测定化合物对特定靶酶催化活性的抑制程度,是计算IC50最经典和直接的项目。

细胞增殖抑制率:评估化合物对肿瘤细胞或正常细胞增殖能力的抑制效果,广泛应用于抗癌药物筛选。

受体结合竞争率:通过放射性或荧光配体竞争实验,测定化合物与特定受体结合的竞争能力。

离子通道电流抑制率:利用膜片钳等技术,测量化合物对特定离子通道电流幅值的抑制百分比。

蛋白质磷酸化水平:通过免疫印迹或ELISA等方法,定量分析化合物对信号通路中关键蛋白磷酸化水平的抑制。

基因表达下调率:采用qPCR或报告基因系统,检测化合物对特定靶基因转录或表达水平的抑制效应。

微生物生长抑制率:评估抗生素或抗菌剂对细菌、真菌等微生物群体生长的抑制能力。

病毒复制抑制率:测定抗病毒化合物在细胞模型中抑制病毒复制或产生感染性病毒颗粒的效率。

自由基清除率:在抗氧化剂筛选中,测量化合物对DPPH、ABTS等自由基的清除能力。

特定代谢产物生成量:通过检测酶促反应或细胞代谢中特定产物的生成量变化,间接反映化合物的抑制效果。

检测范围

小分子化合物库:涵盖天然产物、合成有机分子、已知药物等,用于大规模初筛和构效关系研究。

生物大分子抑制剂:包括多肽、蛋白质、核酸适配体等,针对酶、受体等靶点进行高特异性抑制分析。

中药提取物与组分:对复杂的中药粗提物或分离组分进行活性评价,寻找有效作用部位。

环境污染物与毒素:评估农药、重金属、生物毒素等对特定生物靶标或细胞的半数抑制毒性。

纳米材料与新型制剂:研究纳米药物载体、新型递送系统本身或其负载药物的生物活性与潜在毒性。

抗体与生物类似药:测定治疗性单克隆抗体或生物类似药对细胞表面受体或信号通路的阻断效能。

基因沉默试剂:如siRNA、shRNA、ASO等,评估其对特定基因表达沉默效率的剂量效应关系。

临床前候选药物:在药物研发流程中,对先导化合物进行体外药效学和毒理学IC50精准测定。

食品添加剂与功能因子:分析防腐剂、抗氧化剂或其他功能因子在相关模型中的安全性与有效性浓度。

化妆品功效成分:如美白成分对酪氨酸酶、抗炎成分对相关炎症因子的抑制活性评价。

检测方法

比色法/分光光度法:基于底物或产物在特定波长下的吸光度变化,适用于多数氧化还原酶、水解酶的活性检测。

荧光检测法:利用荧光底物、荧光探针或荧光报告基因,具有灵敏度高、适用于高通量筛选的优点。

化学发光法:通过检测酶促反应产生的化学发光信号,背景低、动态范围宽,常用于激酶、蛋白酶分析。

放射配体结合分析法:使用放射性同位素标记的配体,是测定受体亲和力与竞争抑制的“金标准”方法之一。

表面等离子共振技术:实时、无标记地监测分子间相互作用动力学,可直接获得结合常数与抑制常数。

细胞毒性检测法

MTT/CCK-8法:通过检测活细胞线粒体脱氢酶还原染料的能力,间接反映细胞增殖或存活状态。

流式细胞术:可多参数分析细胞周期阻滞、凋亡比例、特定蛋白表达等,用于计算基于这些事件的IC50。

高通量筛选平台:整合自动化液体处理、多模式检测(吸光、荧光、发光)与数据分析软件,实现大规模IC50测定。

等温滴定量热法:通过精确测量结合过程释放或吸收的热量,直接获取热力学参数,用于小分子与靶标相互作用的分析。

核磁共振技术

检测仪器设备

酶标仪:具备吸光度、荧光、发光等多种检测模式的多功能读板设备,是IC50测定的核心仪器。

紫外-可见分光光度计:用于传统比色法酶活测定,提供准确的吸光度数据。

荧光分光光度计:提供更灵敏的荧光信号检测,适用于低浓度或弱活性样品的分析。

化学发光检测仪:专门用于高灵敏度化学发光信号捕获的仪器,通常集成于高端酶标仪中。

液体闪烁计数器

液闪计数仪

液体闪烁计数器

液闪计数仪

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检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

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