蛋白质电泳试验

检测项目

总蛋白浓度测定：通过电泳前染色或与标准品对比，对样品中的总蛋白质含量进行半定量或定量分析。

蛋白质纯度评估：通过观察电泳条带的单一性或杂带情况，判断目标蛋白质样品的纯化程度。

分子量确定：通过与已知分子量的标准蛋白质（Marker）对比迁移率，估算目标蛋白质的近似分子量。

亚基组成分析：在变性条件下进行电泳，用于分析蛋白质复合物由哪些亚基组成及其各自的分子量。

翻译后修饰检测：如磷酸化、糖基化等修饰会改变蛋白质的迁移率，可通过电泳迁移变化进行初步判断。

蛋白质表达差异分析：比较不同样品（如正常与病变组织）的蛋白质电泳图谱，寻找表达量有差异的条带。

免疫印迹（Western Blot）前处理：作为Western Blot的第一步，将蛋白质按大小分离并转移到膜上。

蛋白质相互作用验证：通过非变性电泳（Native-PAGE）观察蛋白质复合物的形成及大小变化。

多克隆抗体血清效价测定：利用电泳分离抗原，通过免疫印迹评估血清中特异性抗体的含量与特异性。

遗传病筛查：例如通过血清蛋白电泳筛查多发性骨髓瘤（M蛋白）或地中海贫血（血红蛋白条带异常）。

检测范围

血清/血浆蛋白：用于临床诊断，分析白蛋白、球蛋白等各组分的比例与异常条带。

细胞全蛋白裂解液：从培养细胞或组织中提取的总蛋白质，用于研究细胞内的蛋白质表达谱。

组织分浆上清液：从动物或植物组织中提取的可溶性蛋白质混合物。

纯化后的重组蛋白：评估基因工程表达并纯化后的蛋白质产品的纯度、均一性和分子量。

尿液蛋白：用于检测肾脏疾病相关的蛋白尿，分析尿液中异常的蛋白质成分。

脑脊液蛋白：辅助诊断中枢神经系统疾病，如感染、炎症或脱髓鞘病变。

植物组织提取蛋白：用于植物生理、病理研究或转基因植物外源蛋白表达的检测。

细菌/酵母表达蛋白：检测原核或真核微生物表达系统产生的目标蛋白及其表达水平。

疫苗或生物制品：作为质量控制手段，分析疫苗等生物制品中蛋白质成分的纯度与一致性。

食品中的蛋白质组分：用于食品科学中分析不同食物来源的蛋白质构成与掺假鉴定。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：最常用的变性电泳方法，在强还原剂和去垢剂作用下，蛋白质按分子量大小分离。

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）：在不加变性剂的条件下进行，保持蛋白质的天然构象和生物活性，用于分离天然蛋白质或复合物。

等电聚焦电泳（IEF）：根据蛋白质的等电点（pI）进行分离，常用于双向电泳的第一向或分析蛋白质的电荷异质性。

双向电泳（2-DE）：结合IEF（第一向，按电荷分离）和SDS-PAGE（第二向，按分子量分离），用于复杂蛋白质组的高分辨率分离。

琼脂糖凝胶电泳：通常用于大分子量蛋白质复合物、脂蛋白或DNA的电泳分离，孔径较大。

梯度凝胶电泳：使用浓度梯度凝胶（如4-20%），能在同一块胶上更清晰地分离分子量范围很宽的蛋白质混合物。

毛细管电泳（CE）：在细毛细管中进行的高效、自动化电泳技术，所需样品量少，分离速度快，分辨率高。

免疫电泳：将电泳分离与免疫沉淀反应相结合，用于鉴定血清中免疫球蛋白的类型及异常。

考马斯亮蓝染色法：最常用的通用型染色方法，操作简便，灵敏度约为100ng，用于显示凝胶中的蛋白质条带。

银染法：一种高灵敏度的染色方法，灵敏度比考马斯亮蓝高10-100倍，可检测低至纳克级的蛋白质。

检测仪器设备

垂直板电泳槽：用于进行SDS-PAGE、Native-PAGE等聚丙烯酰胺凝胶电泳的核心装置，包括上下缓冲液槽和凝胶夹板。

水平电泳槽：主要用于琼脂糖凝胶电泳或等电聚焦电泳，凝胶平铺在冷却平台上。

电源供应器：为电泳过程提供稳定、可调的直流电压和电流，是控制电泳速度和分辨率的关键设备。

凝胶成像系统：由暗箱、CCD相机和软件组成，用于对染色后的凝胶进行图像采集、存档和分析。

化学发光成像仪：专门用于检测Western Blot等实验中化学发光或荧光信号的成像设备，灵敏度极高。

激光扫描仪：用于高精度扫描荧光染料（如Cy染料）标记的二维电泳凝胶图像。

离心机

离心机：用于样品制备过程中沉淀细胞碎片、浓缩蛋白样品等前处理步骤。

分光光度计/纳米滴度仪

分光光度计/纳米滴度仪：用于精确测定蛋白质样品的浓度，是上样前定量以确保结果可比性的重要工具。

摇床

摇床：在凝胶染色、脱色、洗膜等步骤中提供温和的振荡，使反应均匀充分。

转移电泳槽（转印仪）

转移电泳槽（转印仪）：用于Western Blot实验中将凝胶中分离的蛋白质条带电转移至固相支持膜（如PVDF膜、NC膜）上。

pH计

pH计

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。