信号转导通路测试

检测项目

MAPK/ERK通路活性检测：通过检测ERK1/2的磷酸化水平，评估细胞生长、增殖和分化相关信号通路的激活状态。

PI3K/Akt/mTOR通路活性检测：重点检测Akt和mTOR的磷酸化，用于评估细胞存活、代谢和蛋白质合成信号。

JAK/STAT通路活性检测：检测STAT家族蛋白的磷酸化与核转位，分析细胞因子和生长因子介导的免疫与炎症反应。

Wnt/β-catenin通路活性检测：通过检测β-catenin的稳定性与核内积累，评估该通路在胚胎发育和肿瘤发生中的作用。

NF-κB通路活性检测：监测IκB的降解及p65的核转位，用于炎症反应、免疫应答和细胞凋亡的研究。

TGF-β/Smad通路活性检测：检测Smad2/3的磷酸化及与Smad4的结合，分析细胞生长抑制和上皮间质转化信号。

Hedgehog通路活性检测：通过检测Gli转录因子的活性和亚细胞定位，评估该通路在发育和组织稳态中的功能。

Notch通路活性检测：检测Notch胞内结构域的切割与释放，研究其在细胞命运决定和分化中的信号传递。

凋亡相关通路检测：涵盖Caspase-3/8/9活性、PARP切割及Bcl-2家族蛋白表达，系统评估细胞凋亡信号。

GPCR/cAMP/PKA通路活性检测：通过检测cAMP浓度变化或PKA底物磷酸化，分析G蛋白偶联受体下游信号强度。

检测范围

磷酸化蛋白与激酶活性：涵盖各类信号通路中关键激酶和效应蛋白的磷酸化位点定量与动力学分析。

第二信使分子浓度：包括cAMP、cGMP、Ca2+、IP3、DAG等细胞内信使分子的时空动态变化监测。

蛋白质-蛋白质相互作用：检测信号复合物的形成，如受体-适配体结合、激酶-底物识别等。

转录因子活性与核转位：评估STAT、NF-κB、β-catenin等转录因子的激活及进入细胞核的能力。

基因表达谱变化：分析特定信号通路激活后，下游靶基因的mRNA或蛋白表达水平改变。

受体酪氨酸激酶激活：针对EGFR、FGFR、IGF-1R等受体的自磷酸化及二聚化状态进行检测。

G蛋白活性状态：检测小G蛋白（如Ras、Rho）的GTP/GDP结合比例，反映其激活程度。

表观遗传修饰响应：研究信号通路对组蛋白修饰（如乙酰化、甲基化）和DNA甲基化的调控。

细胞表型关联分析：将通路活性与增殖、凋亡、迁移、自噬等最终细胞表型进行关联。

药物靶点作用验证：评估候选药物对特定信号通路关键节点的抑制或激活效果。

检测方法

Western Blotting：利用特异性抗体检测信号蛋白的表达量及磷酸化修饰，是通路检测的金标准。

酶联免疫吸附试验：采用ELISA试剂盒对通路关键磷酸化蛋白或细胞因子进行定量分析。

免疫荧光与共聚焦显微镜：实现信号蛋白亚细胞定位（如核转位）的可视化与定量分析。

流式细胞术：通过胞内染色技术，在单细胞水平高通量检测磷酸化蛋白等信号分子。

报告基因检测法：将通路特异性响应元件连接荧光素酶或荧光蛋白基因，间接反映通路活性。

蛋白质芯片技术：使用抗体芯片或磷酸化抗体芯片同时筛查多条通路上百个蛋白的修饰状态。

质谱蛋白质组学：基于LC-MS/MS对全蛋白质组或磷酸化蛋白质组进行无偏倚的深度分析。

荧光共振能量转移：利用FRET/BRET技术实时、活细胞监测蛋白质相互作用和构象变化。

钙离子成像技术：使用Fluo-4等荧光探针，实时监测GPCR或通道介导的钙信号动态。

原位杂交与qPCR：通过检测通路下游特异性靶基因的mRNA水平，反推上游通路活性。

检测仪器设备

化学发光成像系统：用于Western Blot、凝胶电泳等结果的化学发光或荧光信号捕获与定量分析。

多功能酶标仪：具备吸光度、荧光、发光、FRET等检测模式，适用于ELISA、报告基因等多种检测。

激光共聚焦显微镜：高分辨率观察信号蛋白的亚细胞定位及动态过程，支持活细胞成像。

流式细胞仪：实现基于荧光信号的单细胞多参数分析，尤其适合磷酸化流式细胞术。

高内涵成像分析系统：自动化进行多孔板细胞成像，定量分析多个通路的形态学与分子标记变化。

液相色谱-串联质谱仪：进行蛋白质组学与修饰组学分析的核心设备，用于全局性信号网络研究。

实时荧光定量PCR仪：精确量化信号通路下游靶基因的转录水平变化。

表面等离子共振仪：无标记实时分析生物分子相互作用动力学，如受体-配体结合。

微孔板离心机与细胞破碎仪：用于快速制备高质量的细胞蛋白裂解液，保障后续检测准确性。

活细胞工作站：整合显微镜、温控及气体环境控制，用于长时间监测信号通路的实时动态。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。