天冬氨酰蛋白酶糖基化测试

检测项目

N-糖基化位点鉴定：确定天冬氨酰蛋白酶上发生N-连接糖基化的特定天冬酰胺残基位置。

糖链结构解析：分析连接在蛋白质上的寡糖链的精确单糖组成、序列及连接方式。

糖型分布分析：测定样品中不同糖链结构（糖型）的相对丰度与分布比例。

糖基化程度（糖基化水平）：评估蛋白质被糖链修饰的整体程度，通常以糖含量占蛋白总量的百分比表示。

唾液酸化水平：定量分析糖链末端唾液酸残基的含量，影响蛋白质的电荷和半衰期。

岩藻糖基化分析：检测核心岩藻糖或末端岩藻糖的存在与含量，与免疫原性相关。

半乳糖基化指数：评估糖链末端半乳糖的覆盖程度，是治疗性抗体关键质量属性之一。

高甘露糖型比例：测定高甘露糖型糖链占总糖型的比例，影响蛋白质的清除速率。

O-糖基化筛查：筛查丝氨酸或苏氨酸残基上可能存在的O-连接糖基化修饰。

糖肽图谱分析：通过质谱获得带有完整糖链的肽段信息，用于表征糖基化微不均一性。

检测范围

治疗性单克隆抗体：如利妥昔单抗、曲妥珠单抗等，其Fc区的N-糖基化直接影响效应功能。

重组治疗性酶：如天冬酰胺酶、溶酶体酶等，其糖基化对稳定性和药代动力学至关重要。

融合蛋白：如依那西普等，其糖基化修饰影响蛋白的溶解度、稳定性和活性。

血浆来源的蛋白酶：如凝血因子等，其糖基化模式复杂，与生物活性和安全性相关。

细胞培养上清液：用于过程开发中监测不同培养条件对蛋白酶糖基化谱的影响。

纯化过程中的样品：在纯化工艺的不同阶段取样，评估纯化步骤对糖基化谱的潜在影响。

稳定性研究样品：在加速或长期稳定性试验中，监测糖基化谱随时间的变化。

生物类似药对比分析：将生物类似药与原研药的糖基化谱进行头对头比较，以证明相似性。

细胞系克隆筛选：评估不同生产细胞克隆所产蛋白酶糖基化的一致性，筛选最优克隆。

疾病生物标志物研究：研究特定疾病状态下，血清或组织中天冬氨酰蛋白酶异常糖基化模式。

检测方法

液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）：高分辨率、高灵敏度的主流方法，用于糖基化位点鉴定和糖型分析。

亲水作用液相色谱（HILIC）：常用于释放后糖链的分离与分析，基于糖链的亲水性进行分离。

毛细管电泳（CE）：基于电荷和大小分离带电荷的糖型（如唾液酸化变体），分辨率高。

肽图分析（Peptide Mapping）：酶切后通过LC-MS分析，直接鉴定糖基化肽段及其修饰位点。

释放N-糖链的PNGase F酶解法：使用PNGase F酶将N-糖链从蛋白质上完整切下，用于后续分析。

凝集素芯片（Lectin Array）：利用多种凝集素同时检测样品中糖链的整体结构特征，进行快速筛选。

凝集素亲和色谱：使用特定凝集素（如Con A， SNA）富集含有特定糖型结构的糖肽或糖蛋白。

荧光标记与HPLC分析：将释放的糖链进行荧光标记（如2-AB），然后通过HPLC进行分离和定量。

电喷雾电离质谱（ESI-MS）：用于完整蛋白或糖肽的分子量测定，评估糖基化宏观不均一性。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）：常用于释放糖链或糖肽的快速质谱分析，提供糖型质量数信息。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪（如Q-TOF， Orbitrap）：提供精确质量数，用于糖基化位点鉴定和复杂糖型结构解析的核心设备。

三重四极杆质谱仪（QQQ）：适用于靶向糖型的绝对定量分析，灵敏度高，重复性好。

超高效液相色谱（UHPLC）系统：与质谱联用，实现糖肽或释放糖链的高效、快速分离。

毛细管电泳系统（CE）：专门用于基于电荷的糖型分离，常与紫外或激光诱导荧光检测器联用。

荧光检测器：用于检测经荧光标记的糖链，是HPLC或CE分析中的高灵敏度检测组件。

凝集素芯片扫描仪：用于读取凝集素芯片上的荧光信号，实现对多种糖结合特征的并行分析。

酶标仪（微孔板阅读器）：用于基于凝集素ELISA或其它比色/荧光法的糖基化水平快速检测。

蛋白质消化与样品处理工作站：自动化完成蛋白质还原、烷基化、酶切等前处理步骤，提高重复性。

真空离心浓缩仪：用于快速浓缩和干燥酶切后或标记后的样品，便于后续上样分析。

数据分析软件（如Byos， GlycoWorkbench）：专门用于处理质谱糖组学数据，进行糖型鉴定、定量和谱图解析的关键工具。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。