抗体依赖性细胞毒性试验

检测项目

靶细胞杀伤率：核心检测指标，定量测定效应细胞在抗体存在下对靶细胞的裂解或杀伤百分比。

抗体效价评估：通过检测不同浓度抗体下的ADCC活性，确定抗体的半数有效浓度，评估其效力。

效应细胞活性：评估所用效应细胞（如PBMC或NK细胞）的基础杀伤能力及其对Fc受体激活的响应性。

Fc受体结合亲和力：间接评估抗体Fc段与效应细胞表面特定FcγR（如CD16）的结合强度与特异性。

最大杀伤平台：测定在饱和抗体浓度下，效应系统所能达到的最高杀伤水平，反映系统的最大潜力。

时间动力学：研究ADCC杀伤效应随时间变化的曲线，确定最佳孵育时间。

效应细胞与靶细胞比例：优化E:T比值，寻找在特定实验体系中最灵敏的检测条件。

抗体亚型对照：使用同型对照抗体进行实验，以确认ADCC活性来源于抗体的特异性结合与Fc功能。

信号通路抑制：通过添加特定抑制剂，研究ADCC效应过程中涉及的细胞内关键信号分子。

细胞因子释放：检测ADCC反应过程中效应细胞释放的IFN-γ、TNF-α等细胞因子，评估免疫激活状态。

检测范围

治疗性单克隆抗体：如利妥昔单抗、曲妥珠单抗等，评估其临床前与临床阶段的ADCC活性。

抗体药物偶联物：评估ADC药物中抗体部分的效应功能，区分其细胞毒性的来源。

双特异性抗体：特别是一端结合肿瘤抗原、另一端结合CD16等Fc受体的双抗，直接评估其介导的细胞杀伤。

Fc工程化改造抗体：检测经过糖基化修饰或氨基酸突变以增强或减弱FcγR亲和力的抗体变体。

生物类似药：与原研药进行头对头比较，确认其ADCC活性的生物相似性。

疫苗诱导的抗体：评估疫苗接种后宿主产生的中和抗体是否具有ADCC等功能性活性。

免疫检查点抑制剂：研究某些免疫调节抗体（如抗CD137）是否通过影响ADCC途径发挥作用。

自然杀伤细胞功能：用于免疫学研究中，评估健康人或患者来源NK细胞的功能状态。

肿瘤细胞系敏感性：筛选对不同抗体介导的ADCC效应敏感或抵抗的肿瘤细胞类型。

血清样本中的抗体：检测患者或动物血清中存在的具有ADCC活性的多克隆或单克隆抗体。

检测方法

铬-51释放法：经典放射性检测法，用Na2⁵¹CrO₄标记靶细胞，通过测量上清放射性计算杀伤率。

乳酸脱氢酶释放法：非放射性方法，基于靶细胞膜破损后LDH释放至培养液，通过酶促反应显色定量。

荧光染料标记法：使用Calcein-AM或CFSE等荧光染料标记靶细胞，通过测量荧光释放来判定杀伤。

流式细胞术法

报告基因法

阻抗实时监测法

DELFIA EuTDA释放法

荧光素酶报告基因法

Caspase活性检测法

显微镜成像分析法

检测仪器设备

多模式微孔板检测仪：用于读取比色、荧光或化学发光信号，是LDH法、报告基因法等的主流设备。

流式细胞仪：用于基于流式细胞的ADCC检测方法，可同时分析靶细胞死亡、效应细胞活化等多参数。

伽马计数器：专门用于测量铬-51释放法等放射性实验释放的γ射线放射性强度。

实时细胞分析仪：通过阻抗传感器无标记、实时动态监测细胞杀伤过程，绘制动力学曲线。

化学发光成像系统：用于高灵敏度捕获报告基因法或某些底物产生的化学发光信号。

倒置荧光显微镜：用于形态学观察和基于成像的ADCC杀伤终点分析，提供视觉证据。

生物安全柜

二氧化碳培养箱

低速离心机

自动化液体处理工作站

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。