肽磷酸化测试

检测项目

磷酸化位点鉴定：确定肽链上发生磷酸化的具体氨基酸残基，通常是丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸。

磷酸化程度定量：测量特定肽段或蛋白质中磷酸化修饰的相对或绝对丰度。

动力学分析：研究磷酸化修饰随时间变化的速率，用于酶动力学研究。

磷酸化肽段富集效率评估：评价使用TiO2、IMAC等方法从复杂样本中分离磷酸化肽段的效果。

翻译后修饰谱分析：在单次分析中同时鉴定多种修饰，包括磷酸化、乙酰化、甲基化等。

激酶底物特异性分析：鉴定特定激酶所偏好的磷酸化肽段序列模体。

磷酸酶活性测定：通过检测去磷酸化过程来评估磷酸酶的活性。

信号通路映射：通过分析多个磷酸化事件，绘制细胞信号通路的激活状态。

生物标志物发现：在疾病样本中寻找差异磷酸化肽段作为潜在的诊断或预后标志物。

药物靶点效力评估：测试激酶抑制剂等药物对特定磷酸化事件的抑制效果。

检测范围

合成多肽：化学合成的、已知序列的短肽，用于方法学建立或作为标准品。

细胞裂解液：来自培养细胞的粗提物，包含复杂的蛋白质和磷酸化肽段混合物。

组织样本提取物：从动物或人体组织中获得，用于病理生理状态下的磷酸化研究。

血清/血浆样本：寻找循环系统中的磷酸化生物标志物，用于无创诊断。

重组蛋白：体外表达的纯化蛋白，用于研究特定激酶-底物相互作用。

免疫沉淀产物：通过抗体富集特定蛋白及其相互作用伙伴，进行靶向磷酸化分析。

亚细胞器组分：如线粒体、细胞核提取物，用于研究磷酸化事件的亚细胞定位。

植物提取物：研究植物信号转导和环境应激响应中的磷酸化事件。

微生物蛋白质组：分析细菌、真菌等微生物在生长、致病过程中的磷酸化调控。

考古生物样本：从古老遗骸中提取的降解蛋白质，尝试分析其残留的修饰信息。

检测方法

质谱法：尤其是液相色谱-串联质谱，是进行高通量、高精度磷酸化位点鉴定和定量的金标准。

酶联免疫吸附测定：使用特异性抗磷酸化氨基酸抗体，对已知靶标进行灵敏的定量检测。

Western Blotting：利用磷酸化特异性抗体对蛋白质样品中的磷酸化状态进行半定量分析。

放射性同位素标记法：使用γ-32P-ATP，通过检测放射性信号来追踪磷酸化反应，灵敏度极高。

磷酸化肽段富集技术：如固定金属离子亲和色谱和二氧化钛色谱，用于在质谱分析前选择性富集磷酸化肽段。

蛋白质芯片技术：将大量蛋白质或抗体点制在芯片上，高通量筛选磷酸化事件或激酶活性。

毛细管电泳法：基于磷酸化引起的电荷变化分离肽段，常与质谱联用。

荧光偏振法：利用荧光标记的磷酸化肽段与抗体结合前后偏振度的变化进行快速定量。

表面等离子体共振：实时、无标记地监测激酶与底物肽段的结合及磷酸化动力学过程。

核磁共振波谱法：用于解析磷酸化修饰对蛋白质或肽段溶液三维结构的影响。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪：如Orbitrap系列和Q-TOF质谱仪，提供精确的质量测量和序列信息。

液相色谱系统：纳升或微升流速的HPLC/UPLC系统，用于在质谱分析前分离复杂肽段混合物。

磷屏成像仪：用于检测和定量Western Blot或凝胶中放射性同位素32P的信号。

化学发光成像系统：捕获Western Blot中化学发光信号，对磷酸化蛋白条带进行成像和定量。

多功能酶标仪：用于ELISA、荧光偏振等基于微孔板的检测，实现高通量读数。

蛋白质纯化系统：如FPLC，用于制备高纯度的激酶、磷酸酶或底物蛋白。

毛细管电泳仪：高效分离带不同电荷的磷酸化与非磷酸化肽段变体。

表面等离子体共振仪：实时监测生物分子间相互作用，无需标记。

核磁共振波谱仪：高场强NMR用于研究磷酸化修饰的原子级结构细节。

自动化样品处理工作站

自动化样品处理工作站：用于实现肽段富集、除盐、上样等步骤的自动化，提高重复性和通量。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。