肽甲基化检测

检测项目

精氨酸单甲基化：检测肽链中精氨酸残基上单个甲基的添加，与转录调控和信号转导相关。

精氨酸对称二甲基化：检测精氨酸残基上两个甲基以对称形式添加，常见于核仁蛋白和RNA结合蛋白。

精氨酸不对称二甲基化：检测精氨酸残基上两个甲基以不对称形式添加，参与基因表达调控和DNA损伤修复。

赖氨酸单甲基化：检测赖氨酸残基ε-氨基上单个甲基的修饰，影响组蛋白功能和染色质状态。

赖氨酸二甲基化：检测赖氨酸残基上连接两个甲基的修饰，是组蛋白修饰的重要标志之一。

赖氨酸三甲基化：检测赖氨酸残基上连接三个甲基的修饰，对基因的激活或沉默起关键作用。

N端α-氨基甲基化：检测肽链N末端氨基酸α-氨基的甲基化，可能影响蛋白质稳定性和相互作用。

谷氨酸甲基化：检测谷氨酸残基侧链羧基的甲基化修饰，是一种相对罕见的翻译后修饰。

天冬酰胺甲基化：检测天冬酰胺残基的甲基化，与细菌趋化性和真核生物信号传导有关。

整体甲基化水平分析：对复杂样品中所有肽段的甲基化修饰进行全局性、半定量或定量分析。

检测范围

组蛋白修饰分析：专注于核心组蛋白（如H3、H4）尾部的赖氨酸和精氨酸甲基化位点鉴定与定量。

非组蛋白修饰分析：检测转录因子、激酶、RNA结合蛋白等非组蛋白中的功能性甲基化修饰。

合成多肽验证：对化学合成或重组表达的多肽进行质量控制和修饰位点确认。

疾病生物标志物发现：从血清、组织等临床样本中寻找与癌症、神经退行性疾病相关的异常甲基化肽段。

酶活性测定：用于评估甲基转移酶或去甲基化酶的活性及其抑制剂筛选。

翻译后修饰互作研究：研究甲基化与其他修饰（如磷酸化、乙酰化）之间的交叉对话。

蛋白质-蛋白质相互作用：鉴定因甲基化修饰而发生改变的蛋白质相互作用界面或复合物。

细胞信号通路解析：追踪信号传导过程中关键蛋白甲基化修饰的动态变化。

药物开发与药理学研究：评估药物对特定蛋白甲基化通路的影响，寻找药物作用靶点。

进化与比较蛋白质组学：比较不同物种间保守的甲基化修饰位点，研究其功能进化。

检测方法

液相色谱-串联质谱法：将肽段分离后通过质谱进行序列解析和修饰位点定位的金标准方法。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱：用于快速测定肽段分子量，初步判断是否存在甲基化增重。

电子转移解离/高能碰撞解离质谱：提供更完整的肽骨架断裂信息，利于精确定位不稳定的甲基化修饰位点。

免疫沉淀结合质谱分析：使用特异性甲基化抗体富集目标肽段，再进行深度质谱鉴定。

稳定同位素标记定量技术：如SILAC、TMT，用于不同样本间甲基化修饰水平的精确比较和定量。

靶向质谱检测：如多反应监测或平行反应监测，对已知的特定甲基化肽段进行高灵敏度、高重复性的定量。

抗体芯片/微阵列：利用多种甲基化特异性抗体同时检测大量样品中的已知修饰。

Edman降解测序：经典的N端测序方法，可用于确定N端或近N端的甲基化修饰。

核磁共振波谱法：用于在溶液状态下研究甲基化修饰对肽段构象和动力学的影响。

生物信息学预测与数据分析：利用软件工具对质谱原始数据进行搜库、鉴定、定量和统计验证。

检测仪器设备

高分辨率液相色谱仪：用于在质谱分析前对复杂肽段混合物进行高效分离，降低基质干扰。

轨道阱系列质谱仪：如Orbitrap Exploris、Fusion系列，提供超高分辨率和质量精度，是修饰鉴定的核心设备。

四极杆-飞行时间质谱仪：具备高扫描速度和灵敏度，适合复杂样本的深度蛋白质组学分析。

三重四极杆质谱仪：主要用于靶向定量分析，在MRM模式下对目标甲基化肽段进行精准定量。

MALDI-TOF/TOF质谱仪：常用于肽质量指纹图谱分析和快速修饰筛查。

纳升液相色谱系统：与质谱联用，实现微量样品的高灵敏度分析，提升低丰度修饰肽段的检出率。

超声波细胞破碎仪：用于从细胞或组织中高效提取蛋白质，为后续酶解和检测做准备。

酶标仪与化学发光成像系统：用于基于抗体的甲基化检测方法的信号读取和分析。

高性能计算集群与服务器：处理海量质谱数据所必需的硬件基础，用于运行搜库和定量软件。

自动化样品处理工作站：实现从蛋白质还原烷基化、酶解到纯化的全流程自动化，提高实验重复性和通量。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。