等电点纯化效能测试

检测项目

目标蛋白等电点(pI)测定：精确测定目标蛋白质的理论与实测等电点，是工艺设计的根本依据。

沉淀完全性评估：检测在设定pH条件下，目标蛋白从溶液中沉淀析出的百分比，评估沉淀效率。

上清液残留蛋白分析：分析沉淀后上清液中残留的目标蛋白及杂蛋白含量，判断沉淀选择性。

沉淀物蛋白组成分析：对收集的沉淀物进行SDS-PAGE或质谱分析，确认目标蛋白纯度及共沉淀杂质。

pH稳定性测试：考察目标蛋白在不同pH缓冲液中孵育一定时间后的活性与结构稳定性。

沉淀重现性测试：在相同工艺条件下进行多次重复实验，评估沉淀质量与收率的波动范围。

工艺收率计算：通过定量分析，计算单步等电点纯化后目标蛋白的质量收率与活性收率。

杂质去除率评估

溶液电导率影响测试：考察不同离子强度（电导率）对等电点沉淀效果的影响，优化缓冲条件。

放大可行性预判：基于小试实验数据，评估工艺参数在放大过程中可能面临的风险与变化。

检测范围

重组治疗性蛋白质：如单克隆抗体、细胞因子、激素等，是其下游纯化工艺的关键步骤之一。

血浆来源蛋白制品：如白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子等传统生物制品的分离纯化。

酶类产品：包括工业用酶、诊断用酶和科研用酶，利用等电点差异进行粗纯化。

多肽与抗生素：某些具有特定等电点的多肽类物质及部分抗生素的初步纯化。

疫苗抗原：病毒样颗粒、重组亚单位疫苗抗原的浓缩与初步纯化过程。

诊断试剂原料：用于纯化诊断试剂中所需的特异性抗原或抗体蛋白。

细胞培养上清液：作为捕获步骤，从成分复杂的培养上清中沉淀目标产物。

发酵液或裂解液：处理原核或真核细胞表达系统产生的初始物料，进行初级分离。

层析洗脱峰组分：对离子交换或其他层析后的峰组分进行进一步浓缩与精制。

工艺中间品与原液：对纯化工艺路线中的中间产品进行质量监控与过程控制。

检测方法

等电聚焦电泳(IEF)：高分辨率测定蛋白质等电点的经典方法，使用预制或自制凝胶。

毛细管等电聚焦(cIEF)：自动化、高精度、定量化的pI测定技术，适用于微量样品分析。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)：定性分析沉淀前后样品中蛋白质的组成、纯度与分子量。

高效液相色谱(HPLC)：采用反相、尺寸排阻或离子交换模式，定量分析蛋白纯度与含量。

紫外-可见分光光度法：通过测定280nm等处吸光度，快速定量样品中的总蛋白浓度。

酶联免疫吸附测定(ELISA)：特异性定量目标蛋白含量或关键杂质（如宿主蛋白）的含量。

动态光散射(DLS)：监测沉淀过程中蛋白质聚集体的粒径分布与形成动力学。

浊度测定法：通过测量溶液在特定波长下的光散射或透光率变化，间接反映沉淀程度。

生物活性测定：采用细胞学、酶学或结合实验，评估纯化前后目标蛋白的生物学活性回收率。

pH滴定与沉淀曲线绘制：系统改变pH值，测定沉淀蛋白量，绘制曲线以确定最佳沉淀pH范围。

检测仪器设备

等电聚焦电泳系统：包含电泳仪、冷却装置和专用凝胶，用于传统IEF分析。

全自动毛细管电泳仪：集成cIEF功能，实现高通量、自动化的蛋白质pI分析。

成像与凝胶分析系统：用于对IEF、SDS-PAGE凝胶进行染色、成像及条带密度定量分析。

高效液相色谱仪(HPLC/UPLC)：配备多种检测器（UV， FLD），用于高精度纯度与浓度分析。

紫外-可见分光光度计：快速进行蛋白质浓度测定及浊度初步评估的基础设备。

酶标仪：用于执行ELISA、活性检测等基于微孔板的定量吸光度或荧光检测。

纳米粒度及Zeta电位分析仪：整合DLS技术，测量蛋白质聚集粒径及表面电荷（Zeta电位）。

精密pH计：配备高精度复合电极，用于工艺过程中pH值的精确测量与控制。

高速冷冻离心机：用于实现等电点沉淀后固液分离的关键设备，需精确控制温度与转速。

生物反应器或搅拌控制系统：用于工艺开发与放大，精确控制沉淀过程中的混合、pH调节等参数。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。