信号通路关联检测

检测项目

MAPK/ERK通路活性检测：通过检测磷酸化ERK1/2蛋白水平，评估细胞增殖、分化相关信号通路的激活状态。

PI3K/AKT/mTOR通路分析：量化磷酸化AKT和S6RP等关键蛋白，监控细胞生长、代谢与存活的核心信号网络。

Wnt/β-catenin通路检测：测定β-catenin的核转位及下游靶基因表达，用于研究胚胎发育和肿瘤发生。

NF-κB通路核转位检测：通过免疫荧光或细胞组分分离技术，观察NF-κB家族蛋白从胞质到胞核的迁移过程。

JAK-STAT信号磷酸化检测：利用磷酸化特异性抗体，精确测量STAT蛋白的激活水平，关联免疫与炎症反应。

TGF-β/Smad通路报告基因检测：采用荧光素酶报告系统，定量Smad蛋白复合物调控的转录活性变化。

Hippo通路效应分子检测：分析YAP/TAZ的亚细胞定位及磷酸化状态，评估组织生长与器官大小的调控信号。

Notch通路胞内域（NICD）切割检测：通过Western Blot检测NICD的生成，揭示细胞间通讯与命运决定过程。

Hedgehog通路Gli转录因子活性检测：测量Gli蛋白的活性形式及其下游基因表达，研究胚胎模式形成。

凋亡相关通路Caspase级联检测：通过Caspase-3/7等酶活或切割底物检测，系统评估细胞凋亡信号的强度。

检测范围

磷酸化蛋白质组学：大规模鉴定与定量信号转导过程中发生的蛋白质磷酸化修饰事件。

激酶活性谱分析：使用特异性底物或芯片，全局性分析样本中数百种激酶的活性变化。

信号节点蛋白互作网络：研究通路中关键蛋白（如受体、衔接蛋白、激酶）之间的物理相互作用。

第二信使分子浓度监测：检测cAMP、cGMP、Ca²⁺、IP3、DAG等第二信使在细胞内的动态波动。

转录因子DNA结合活性：通过EMSA或报告基因等方法，测定信号通路末端转录因子的DNA结合能力。

表观遗传修饰关联分析：探究信号通路对组蛋白修饰、DNA甲基化等表观遗传景观的调控作用。

代谢物变化关联检测：分析信号通路激活后引发的关键代谢物（如ATP、乙酰辅酶A）水平变化。

单细胞水平信号异质性：在单个细胞分辨率下，分析同一群体内细胞间信号通路活性的差异。

时空动态成像分析：对信号分子在活细胞内的位置、移动和活性进行实时、可视化的追踪。

跨膜受体激活状态：检测受体酪氨酸激酶（RTK）等膜受体的二聚化、内化及自磷酸化状态。

检测方法

Western Blotting：基于抗原-抗体反应，通过电泳分离与显色，半定量检测特定信号蛋白及其修饰。

酶联免疫吸附试验（ELISA）：利用固相包被和酶标抗体，高灵敏度定量溶液中的目标磷酸化蛋白或细胞因子。

免疫组织化学/免疫荧光（IHC/IF）：在组织切片或细胞爬片上原位可视化信号蛋白的表达与定位。

流式细胞术（Phospho-flow）：结合磷酸化特异性抗体荧光标记，实现单细胞水平的多通路蛋白磷酸化高速检测。

报告基因检测法：将通路响应元件与荧光素酶或荧光蛋白基因相连，通过报告基因表达强度间接反映通路活性。

蛋白质芯片技术：将大量抗体或蛋白质点制于芯片上，实现一次实验对多个信号分子的高通量筛查。

邻近连接技术（PLA）：通过DNA链接的抗体对，在蛋白质互作或修饰位点近距离时产生可检测信号，实现单分子水平检测。

荧光共振能量转移（FRET）：利用供体与受体荧光基团间的能量转移效率，实时监测活细胞内蛋白质相互作用或构象变化。

质谱（MS）为基础的磷酸化组学：利用液相色谱-质谱联用技术，对复杂样本中的磷酸化肽段进行全局性鉴定与定量。

微滴式数字PCR（ddPCR）或qPCR：精确量化信号通路下游特定靶基因的mRNA转录水平变化。

检测仪器设备

多功能酶标仪：具备吸光度、荧光和化学发光检测模式，用于ELISA、报告基因等微孔板实验的读数。

流式细胞仪：配备多激光器与高灵敏度探测器，用于进行多参数磷酸化流式细胞分析（Phospho-flow）。

激光共聚焦显微镜：提供高分辨率、光学切片成像能力，用于亚细胞定位和FRET、荧光漂白恢复等动态研究。

蛋白质印迹成像系统：包括化学发光、荧光及近红外成像仪，用于Western Blot条带的灵敏捕获与定量分析。

实时荧光定量PCR仪：用于对信号通路下游响应基因的mRNA表达水平进行精确、可重复的定量分析。

高内涵成像分析系统：自动化显微镜与图像分析软件结合，实现多孔板中细胞形态与多重荧光标记的高通量定量分析。

液相色谱-串联质谱联用仪（LC-MS/MS）：进行大规模、深度磷酸化蛋白质组学分析的核心设备。

表面等离子共振（SPR）仪：实时、无标记地测量生物分子（如信号通路蛋白）间的相互作用动力学参数。

等温滴定量热仪（ITC）：通过测量结合过程的热变化，直接测定蛋白质-蛋白质或蛋白质-小分子相互作用的亲和力与热力学参数。

数字PCR系统：提供绝对定量能力，无需标准曲线即可精确定量低频信号分子或稀有转录本，灵敏度极高。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。