免疫沉淀分析试验

检测项目

蛋白质-蛋白质相互作用验证：用于验证两个或多个疑似存在相互作用的蛋白质是否能在生理条件下结合。

内源性蛋白复合物分离：从天然细胞裂解液中分离并富集由内源性基因表达的真实蛋白复合物。

抗体特异性验证：评估特定抗体是否能有效且特异地识别并沉淀其靶蛋白。

翻译后修饰检测：研究蛋白质的磷酸化、泛素化、乙酰化等修饰状态及修饰水平。

蛋白-DNA相互作用（ChIP-IP）：作为染色质免疫沉淀（ChIP）的核心步骤，用于富集与特定DNA序列结合的蛋白。

抗原表位定位：通过使用针对不同蛋白区域的抗体进行IP，初步确定抗体所识别的表位区域。

信号通路蛋白复合物分析：分离信号转导通路中上下游蛋白形成的瞬时或稳定复合物。

受体-配体结合研究：验证细胞表面受体与其相应配体之间的特异性结合。

病毒/病原体宿主蛋白互作：研究病原体蛋白入侵宿主细胞后与哪些宿主蛋白发生相互作用。

蛋白稳定性与半衰期评估：结合蛋白质合成抑制剂，通过IP检测特定蛋白在不同条件下的降解速率。

检测范围

哺乳动物细胞培养物：最常用的样本来源，包括贴壁细胞、悬浮细胞及各种细胞系。

动物组织样本：从模式动物或临床样本中获取的肝脏、脑、肿瘤等组织匀浆液。

植物组织提取物：适用于研究植物生理、病理过程中的蛋白互作与修饰。

酵母细胞裂解液：常用于利用酵母双杂交系统初筛后的互作蛋白验证。

细菌裂解液：用于研究原核生物内的蛋白复合物或重组表达蛋白的相互作用。

体液样本：如血清、血浆、脑脊液等，用于检测可溶性蛋白复合物或自身抗体靶抗原。

无细胞表达系统：在体外转录/翻译系统中产生的蛋白，用于研究互作的直接性。

亚细胞组分：如细胞核、线粒体、细胞膜等细胞器提取物，进行区域特异性互作研究。

临床病理标本：福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织经特殊处理后的提取物。

环境微生物群落：从复杂环境样本中提取的微生物总蛋白，用于宏蛋白质组学研究。

检测方法

直接免疫沉淀法：将特异性抗体直接与样品孵育，然后加入固相支持物（如琼脂糖珠）捕获抗原-抗体复合物。

间接免疫沉淀法：先将抗体与结合了Protein A/G的磁珠或琼脂糖珠孵育，再与样品反应，减少非特异性结合。

串联亲和纯化：对靶蛋白进行双重标签标记，通过两步纯化极大提高复合物的特异性与纯度。

免疫共沉淀：用针对已知蛋白A的抗体进行IP，然后检测是否共沉淀出疑似互作蛋白B，以证明两者结合。

拉下实验：使用固定化的重组蛋白、多肽或核酸作为“诱饵”，从裂解液中“拉下”与之结合的蛋白。

荧光免疫沉淀：使用荧光标记的抗体或样本，在沉淀后进行荧光检测，提升灵敏度或用于流式分析。

自动化免疫沉淀：在液体处理工作站上实现裂解、孵育、洗涤和洗脱步骤的自动化，提高通量与重复性。

微球偶联法：将抗体共价偶联到磁性微球上，便于利用磁力进行快速分离与洗涤。

快速洗涤离心法：通过优化洗涤缓冲液成分与离心条件，在保证纯度前提下缩短实验周期。

洗脱与变性：使用低pH缓冲液、竞争性多肽或SDS上样缓冲液煮沸等方式，将目标蛋白从固相支持物上洗脱下来以供后续分析。

检测仪器设备

低温高速离心机：用于样本制备、沉淀复合物的快速离心收集以及上清与沉淀的分离。

旋转混匀仪/侧摆摇床：确保抗体、珠子与样品在孵育过程中充分且温和地混合。

磁力分离架：当使用磁性微球时，用于快速固定并分离磁珠复合物，方便上清移除与缓冲液更换。

蛋白质电泳系统：包括电泳槽和电源，用于对免疫沉淀产物进行SDS-PAGE分离。

半干/湿式转印仪：将凝胶中分离的蛋白质转移至PVDF或硝酸纤维素膜上，用于后续免疫印迹检测。

化学发光成像系统：检测并记录免疫印迹后膜上的化学发光信号，对目标蛋白进行定性与半定量分析。

微量分光光度计：精确测量洗脱后蛋白质的浓度，为下游质谱分析等步骤提供定量依据。

超声波细胞破碎仪

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。