流式细胞分选测试

检测项目

免疫表型分析：利用荧光标记抗体对细胞表面或内部的特定蛋白（如CD分子）进行检测，以鉴定和区分不同的细胞亚群。

细胞周期分析：通过DNA染料（如PI）对细胞核DNA进行染色，量化G0/G1期、S期和G2/M期的细胞比例，评估细胞增殖状态。

细胞凋亡检测：使用Annexin V/PI等染料组合，区分早期凋亡、晚期凋亡及坏死细胞，用于研究细胞死亡机制。

细胞内因子检测：经破膜固定后，对细胞内的细胞因子（如IFN-γ、IL-2）、信号分子或转录因子进行染色分析。

钙离子流检测：使用钙离子敏感性荧光染料（如Fluo-3, Indo-1），实时监测细胞内钙离子浓度的动态变化。

膜电位测定：应用亲脂性阳离子荧光染料（如DiOC6(3)）来评估线粒体膜电位的变化，常用于凋亡研究。

活性氧（ROS）检测：使用特异性荧光探针（如DCFH-DA）检测细胞内活性氧自由基的水平。

细胞增殖追踪：利用荧光染料（如CFSE）均等标记细胞膜蛋白，通过代际稀释来追踪细胞分裂次数。

染色体分析与分选：对染色体悬液进行特异性染色，根据荧光强度和染色体大小进行核型分析和分选。

干细胞侧群（SP）分析：基于Hoechst 33342染料的外排能力，鉴定具有干细胞特性的侧群细胞。

检测范围

外周血单个核细胞（PBMCs）：包括淋巴细胞、单核细胞等，是免疫学研究最常用的样本类型。

培养的贴壁或悬浮细胞系：适用于各种肿瘤细胞、原代培养细胞的功能与状态分析。

骨髓造血干细胞与祖细胞：用于造血系统发育、白血病分型及干细胞移植研究。

实体组织解离细胞：如肿瘤组织、脾脏、淋巴结、胸腺等经酶消化后获得的单细胞悬液。

微生物与酵母细胞：可用于细菌、真菌的活性、大小、复杂度及转基因表达分析。

植物原生质体与细胞核：应用于植物基因组学、倍性分析和特定细胞器研究。

微球与人工颗粒：用于多重液相芯片检测、仪器校准和实验对照设置。

稀有细胞检测与分选：如循环肿瘤细胞（CTCs）、胎儿有核红细胞等，在临床诊断中意义重大。

外泌体与微囊泡：使用特定标记或膜染料，对纳米级囊泡进行检测和分析。

染色体与细胞核：用于基因组学、细胞遗传学研究和特定染色体文库构建。

检测方法

直接免疫荧光法：使用荧光素直接偶联的一抗与靶抗原结合，步骤简单，非特异性结合少。

间接免疫荧光法：先用未标记的一抗结合，再用荧光标记的二抗识别，可实现信号放大。

细胞内染色法：需先对细胞进行固定和破膜处理，使抗体或染料能够进入胞内与靶标结合。

活细胞染料标记法：使用可穿透活细胞膜的荧光染料（如钙离子染料、CFSE）进行功能性标记。

死活细胞鉴别染色：在染色前使用PI、7-AAD或死活染料区分并排除死细胞，保证数据准确性。

多色荧光方案设计：科学组合不同荧光特性的抗体与染料，同时检测多个参数，需考虑光谱重叠与补偿。

设门分析策略

前向散射与侧向散射设门：根据细胞的大小（FSC）和颗粒复杂度（SSC）初步区分不同细胞群体。

荧光强度阈值设定：设定合适的荧光信号阈值，以区分阳性与阴性表达群体，通常以同型对照为基准。

分选模式选择：根据目标细胞的纯度和活性要求，选择纯度模式、收率模式或单细胞模式进行分选。

无菌与生物安全操作：在涉及活细胞后续培养或病原样本时，需在生物安全柜内进行无菌操作，并对仪器管路消毒。

检测仪器设备

流式细胞分选仪（FACS）：核心设备，集成液流系统、光学系统、电子系统和分选系统，能同时对细胞进行分析和分选。

空气冷却激光器：提供单色或多色激光束以激发荧光染料，常见有488nm蓝激光、405nm紫激光、640nm红激光等。

光电倍增管（PMT）探测器

流动室与喷嘴：样本流在此与鞘液汇合形成层流，实现细胞单列排队，是产生液滴并进行分选的关键部件。

液滴充电与偏转板：系统对包含目标细胞的液滴充电，带电液滴通过高压偏转板时发生路径偏转，从而实现分选收集。

鞘液压力与真空系统：提供稳定压力的鞘液流以包裹样本流，并产生稳定的液滴断裂点；真空系统用于废液收集。

温控样本台：保持待测样本处于适宜温度（如4℃），以维持细胞活性，尤其对于长时间分选至关重要。

无菌收集装置

同轴超声喷嘴清洗站：用于自动清洗分选喷嘴，防止蛋白或细胞残留造成的堵塞和交叉污染。

数字化电子系统与计算机：将光信号转换为数字信号，运行专业分析软件进行数据采集、实时显示、分析和分选控制。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。