腺苷二磷酸核糖毒性检测

检测项目

总ADP-核糖基化水平：检测细胞内所有蛋白质上ADP-核糖基化修饰的总量，反映整体修饰活性。

单ADP-核糖基化（MARylation）：特异性检测由单ADP-核糖转移酶催化的，单个ADP-核糖单元连接到靶蛋白的修饰水平。

多聚ADP-核糖基化（PARylation）：特异性检测由PARP酶家族（如PARP1）催化的，长链或分支状多聚ADP-核糖聚合物水平。

PAR链长度分析：测定多聚ADP-核糖链的平均长度和分布，长链PAR通常与更强的信号和潜在的毒性相关。

NAD+消耗速率：监测ADP-核糖基化反应过程中关键底物NAD+的消耗速度，间接评估修饰活性和毒性潜力。

线粒体ADP-核糖基化：专门检测发生在线粒体蛋白质上的修饰，与线粒体功能障碍和细胞死亡密切相关。

组蛋白ADP-核糖基化：检测核心组蛋白上的修饰，影响染色质结构和基因表达，参与表观遗传调控。

DNA损伤诱导的PARylation：在基因毒性应激下，检测DNA损伤位点周围快速形成的PAR信号，评估DNA损伤应答强度。

PARP酶活性测定：直接测量PARP1等关键酶的催化活性，是评估其过度激活导致毒性通路的核心指标。

游离PAR分子检测：检测从蛋白质上水解下来的游离多聚ADP-核糖分子，其积累可能具有信号分子或毒性作用。

检测范围

神经退行性疾病研究：如帕金森病、阿尔茨海默病等，研究异常PARylation与神经元死亡的关系。

癌症研究与治疗：评估PARP抑制剂疗效，监测化疗药物引起的DNA损伤和PARP过度激活。

缺血再灌注损伤：在心肌梗死、脑卒中等模型中，检测能量耗竭和氧化应激引发的PARP1依赖性细胞死亡。

炎症与免疫反应：研究巨噬细胞等免疫细胞中PARylation在炎症小体激活和细胞因子释放中的作用。

代谢性疾病模型：在糖尿病、非酒精性脂肪肝等模型中，探究代谢压力下的ADP-核糖基化变化。

药物毒理学评价：评估新药是否会引起DNA损伤或异常激活PARP通路，导致细胞毒性。

衰老生物学研究：探究随着年龄增长，基因组不稳定性和PARP持续激活在衰老过程中的作用。

遗传病机制研究：如研究共济失调毛细血管扩张症等DNA修复缺陷疾病中的PAR信号异常。

细胞死亡机制研究：区分parthanatos（PAR依赖性细胞死亡）与其他形式的程序性细胞死亡。

基础信号转导研究：在各种细胞信号通路中，阐明ADP-核糖基化作为动态翻译后修饰的功能。

检测方法

免疫印迹法（Western Blot）：使用抗PAR、抗MAR或抗泛ADP-核糖抗体对蛋白质样品进行半定量分析。

酶联免疫吸附试验（ELISA）：高通量定量检测细胞裂解液或组织匀浆中的总PAR或特定修饰蛋白水平。

免疫荧光/组织化学：利用特异性抗体进行细胞或组织原位染色，可视化观察ADP-核糖基化的空间分布。

液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）：对ADP-核糖基化修饰进行精确定位、鉴定和绝对定量，是金标准方法。

点杂交法（Dot Blot）：快速、半定量地筛查大量样品中的总PAR含量，无需进行电泳分离。

放射性标记法：使用放射性标记的NAD+作为底物，在体外或体内实验中高灵敏度地追踪ADP-核糖基化反应。

基于点击化学的检测：使用炔烃修饰的NAD+类似物进行代谢标记，通过点击反应连接报告基团进行高特异性检测。

流式细胞术：使用荧光标记的PAR抗体对固定后的细胞进行染色，实现单细胞水平的修饰水平分析。

比色/荧光法NAD+检测：通过检测反应前后NAD+浓度的变化，间接推算ADP-核糖基化活性。

基于蛋白质微阵列的检测：将多种候选底物蛋白点制在芯片上，系统性筛选ADP-核糖基化的靶点。

检测仪器设备

化学发光成像系统：用于Western Blot、Dot Blot等免疫检测结果的成像和光密度定量分析。

酶标仪：用于ELISA、比色法及荧光法检测，实现96孔或384孔板的高通量读数。

激光共聚焦显微镜：用于高分辨率、多通道的免疫荧光成像，精确观察亚细胞定位。

高效液相色谱-串联质谱仪（HPLC-MS/MS）：进行修饰组学分析的核心设备，用于精确鉴定和定量修饰肽段。

流式细胞仪：用于基于免疫荧光的单细胞水平PARylation快速分析和分选。

液体闪烁计数器：用于检测放射性标记NAD+掺入实验中的放射性信号，灵敏度极高。

蛋白质印迹电泳及转膜系统：包括电泳槽、电源和转膜仪，是进行Western Blot分析的基础设备。

微孔板洗板机：配合ELISA实验，实现自动化、标准化的洗板步骤，提高实验重复性。

生物分析仪/毛细管电泳系统：可用于分析PAR链的长度分布和纯度。

蛋白质芯片点样与扫描仪：用于制备和读取蛋白质微阵列，进行大规模底物筛选研究。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。