凝胶过滤色谱分析

检测项目

分子量测定：通过标准曲线，测定未知蛋白质、多肽或核酸的近似分子量。

聚合体分析：检测蛋白质药物中高分子量聚合体的含量，是生物药关键质量属性。

单体纯度分析：评估样品中目标单体分子的纯度，分离其与片段或降解产物。

寡聚体状态鉴定：确定蛋白质在溶液中的天然寡聚状态，如二聚体、四聚体等。

样品脱盐与缓冲液置换：将样品从一种缓冲体系快速转移到另一种缓冲体系中，并去除小分子盐类。

蛋白复合物分离：根据复合物与单个亚基的尺寸差异，分离并分析蛋白质复合物。

多糖分子量分布：分析多糖或多糖缀合物（如肝素）的分子量分布范围。

病毒样颗粒纯化：基于尺寸差异，纯化病毒样颗粒或纳米颗粒。

抗体片段分析：分离和评估Fab、F(ab‘)2、scFv等抗体片段。

血浆蛋白组分分离：初步分离血浆或血清中的不同蛋白质组分。

检测范围

单克隆抗体与抗体药物：用于分析抗体聚合体、片段及完整性，是生物药放行检测的关键。

重组蛋白药物：评估重组蛋白产品的纯度、聚合体及分子量大小。

疫苗产品：分析疫苗抗原的聚集状态、纯度以及病毒颗粒的尺寸。

基因治疗产品：纯化和分析腺相关病毒、慢病毒等载体及其空壳率。

酶与激素：测定酶制剂的分子量及寡聚化状态，分析激素的纯度。

质粒DNA与RNA：分离不同构型的质粒DNA（超螺旋、开环、线性），分析RNA的聚集或降解。

多糖与蛋白多糖：测定透明质酸、肝素等多糖的分子量分布及均一性。

合成聚合物：应用于水溶性合成高分子的分子量分布分析。

细胞培养上清：从复杂培养液中初步纯化目标分泌蛋白。

食品与农业科学：用于分析食品蛋白、酶制剂以及农业生物制品。

检测方法

标准曲线法：使用已知分子量的标准品绘制洗脱体积-对数分子量标准曲线，用于未知样品测定。

等度洗脱法：使用单一成分和恒定流速的缓冲液进行洗脱，是最常用的操作模式。

样品前处理：包括离心过滤去除不溶物、调整样品浓度和缓冲液成分以适应色谱条件。

柱平衡与校准：使用流动相充分平衡色谱柱，并用标准品进行柱效和分离范围校准。

上样体积优化：根据柱体积和分离目的优化上样量，以平衡分辨率与上样量。

流速控制：根据柱规格和填料类型设置合适流速，以保证分离效果并保护色谱柱。

在线检测法：连接紫外、示差折光或多角度光散射等检测器进行实时监测。

馏分收集与分析：按时间或体积收集洗脱馏分，用于后续的活性测定或其他分析。

柱清洗与保存：使用规定溶液清洗去除柱内残留物，并用保存液妥善保存色谱柱。

数据解析与报告：通过色谱工作站计算峰面积、保留时间，并生成分子量分布报告。

检测仪器设备

高效液相色谱系统：提供高压输液泵、自动进样器、柱温箱和系统控制器，是核心分离平台。

凝胶过滤色谱柱：内装不同分离范围的亲水多孔凝胶填料（如葡聚糖、琼脂糖基），是关键分离部件。

紫外-可见光检测器：最常用的在线检测器，通过280nm（蛋白质）或260nm（核酸）检测吸光度。

示差折光检测器：通用型检测器，通过测量溶液折射率变化来检测无紫外吸收的化合物（如多糖）。

多角度激光光散射检测器：与SEC联用可直接测定绝对分子量，无需依赖标准曲线。

在线粘度检测器：与MALS联用，可进一步获取分子结构信息（如支化度）。

馏分收集器：自动收集经色谱柱分离后的特定时间段或信号触发的洗脱液。

色谱数据处理工作站：控制仪器运行，采集、处理和分析色谱数据，并生成报告。

脱气装置：用于在线或离线去除流动相中的溶解气体，防止泵和检测器产生气泡干扰。

样品前处理设备：包括离心机、滤膜或超滤离心管，用于样品的澄清和浓缩。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。