蛋白质凝胶电泳分析检测

检测项目

蛋白质分子量测定：通过与已知分子量的标准蛋白条带对比，估算目标蛋白的表观分子量。

蛋白质纯度分析：评估样品中目标蛋白的纯度，判断是否存在杂蛋白或降解产物。

蛋白质表达水平比较：对不同样本（如处理组与对照组）中特定蛋白的表达丰度进行半定量或相对定量分析。

蛋白质翻译后修饰检测：通过条带迁移率变化或特异性抗体，初步分析磷酸化、糖基化等修饰。

蛋白质复合物组分分析：在非变性条件下分离并鉴定蛋白质复合物中的各个亚基。

蛋白质降解产物鉴定：检测样品中是否存在因蛋白酶作用或储存不当产生的蛋白降解片段。

抗体特异性验证：验证抗体是否能特异性识别目标蛋白，并评估其交叉反应性。

蛋白质样品浓度估算：通过染色强度与标准品对比，粗略估算样品中总蛋白或特定蛋白的浓度。

蛋白质等电点初步判断：通过等电聚焦电泳分离蛋白质，根据其等电点进行分离和初步鉴定。

蛋白质相互作用验证：结合免疫共沉淀等技术，验证蛋白质间的相互作用。

检测范围

细胞裂解液：来自动物、植物或微生物细胞的整体蛋白质组样品。

组织匀浆液：从各种生物组织中提取的复杂蛋白质混合物。

血清/血浆样本：用于临床诊断、疾病标志物筛选的体液蛋白质样品。

重组蛋白样品：通过基因工程表达并纯化的单一目标蛋白质。

抗体样品：用于评估单克隆或多克隆抗体的纯度、完整性及亚型。

酶制品：检测工业或科研用酶制剂的纯度和分子量均一性。

疫苗制品：对疫苗中的抗原蛋白成分进行鉴定和纯度分析。

食品蛋白提取物：分析食品中的蛋白质组成、过敏原或掺假成分。

法医生物样本：对痕量生物检材中的蛋白质进行种属鉴定或个体识别分析。

环境微生物蛋白样品：研究环境样本中微生物群落的蛋白质表达谱。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：最常用的变性电泳方法，根据分子量分离蛋白质。

非变性PAGE：在不添加SDS和还原剂的条件下分离蛋白质，保持其天然构象和活性。

Tricine-SDS-PAGE：适用于分离小分子多肽和低分子量蛋白（1-100 kDa）。

等电聚焦电泳：根据蛋白质等电点的差异在pH梯度中进行分离。

双向电泳：第一向等电聚焦结合第二向SDS-PAGE，用于复杂蛋白质组的高分辨率分离。

梯度凝胶电泳：使用浓度梯度凝胶，扩大有效分离范围，提高分辨率。

考马斯亮蓝染色法：通用型染色方法，操作简单，灵敏度约为100 ng。

银染法：高灵敏度染色方法，可检测低至1 ng的蛋白质条带。

Western Blotting：将凝胶中的蛋白转印至膜上，用特异性抗体进行免疫检测。

荧光染色检测法：使用SYPRO Ruby等荧光染料，灵敏度高且线性范围宽。

检测仪器设备

垂直板电泳槽：用于进行SDS-PAGE、非变性PAGE等凝胶电泳的核心装置。

水平电泳系统：主要用于等电聚焦电泳和琼脂糖凝胶电泳。

电源/电泳仪：为电泳过程提供稳定、可调的电压、电流和功率。

凝胶成像系统：配备CCD或CMOS相机，用于拍摄和记录染色后的凝胶图像。

化学发光成像仪：专门用于检测Western Blot中化学发光信号的成像设备。

激光扫描仪：用于高分辨率扫描荧光染色的凝胶或双向电泳胶图。

凝胶灌制装置：包括玻璃板、夹子、梳子等，用于手工灌制聚丙烯酰胺凝胶。

半干转印仪: 将蛋白质从凝胶快速转印至PVDF或NC膜上的装置。

湿式转印槽: 采用浸没式转印，适用于大分子量蛋白的稳定转印。

图像分析软件: 如ImageJ、Quantity One等，用于分析条带分子量、光密度和定量比较。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。