脱氧尿苷衍生物免疫组化分析

检测项目

BrdU掺入检测：通过检测胸腺嘧啶核苷类似物BrdU在DNA合成期的掺入，特异性标记增殖细胞。

EdU点击化学检测：利用EdU的乙炔基与荧光染料叠氮化物进行高效、温和的点击化学反应，标记新生DNA。

细胞增殖指数分析：通过统计阳性细胞比例，定量评估特定组织或细胞群体的增殖活性。

S期细胞鉴定：特异性识别处于DNA合成期（S期）的细胞，进行细胞周期定位。

肿瘤增殖活性评估：在肿瘤组织切片中评估肿瘤细胞的增殖速率，用于病理分级和预后判断。

干细胞与祖细胞增殖研究：用于标记和研究成体干细胞、祖细胞等具有增殖潜能细胞的动态。

组织损伤修复监测：追踪在组织损伤或应激条件下，参与修复过程的增殖细胞。

药物疗效评价：通过比较给药前后细胞增殖率的变化，评估抗癌药物或生长抑制剂的疗效。

发育生物学研究：应用于胚胎或幼体组织，揭示生长发育过程中的细胞增殖模式。

DNA损伤与修复研究：结合其他标记物，研究DNA损伤后复制叉的进程与修复关联的DNA合成。

检测范围

石蜡包埋组织切片：适用于经福尔马林固定、石蜡包埋的长期保存的临床或实验组织样本。

冰冻组织切片：适用于需要保持抗原活性或进行快速检测的新鲜冰冻组织样本。

培养细胞爬片：适用于在盖玻片或腔室爬片上生长的贴壁细胞系的增殖分析。

悬浮细胞涂片：适用于血液细胞、淋巴细胞或悬浮培养的细胞，经离心涂片后检测。

动物活体标记组织：适用于经腹腔注射或饲喂BrdU/EdU的活体动物，取其各器官组织进行检测。

人体临床病理标本：适用于手术切除的肿瘤、增生性病变等人体组织标本的增殖分析。

神经发生研究样本：特别适用于大脑海马区、室管膜下区等神经发生区域的增殖细胞检测。

皮肤与黏膜上皮组织：用于检测表皮基底层、肠道隐窝等具有高更新率上皮组织的增殖细胞。

淋巴组织与免疫细胞：用于脾脏、淋巴结及活化淋巴细胞的增殖反应研究。

植物分生组织：经过适当方法适配，也可用于植物根尖、茎尖分生组织的细胞分裂研究。

检测方法

活体标记与取样：通过注射或饲喂方式将BrdU或EdU导入活体动物，经特定时间后取目标组织。

组织固定与包埋：采用多聚甲醛或福尔马林进行组织固定，随后进行脱水、透明和石蜡包埋。

切片与裱片：使用切片机将组织块切成4-8微米薄片，并裱贴于防脱载玻片上。

脱蜡与水化：将石蜡切片依次经二甲苯脱蜡和梯度乙醇水化，至蒸馏水状态。

抗原修复：对于BrdU检测，通常需要进行酸处理或酶消化以暴露被掩蔽的抗原表位。

点击化学反应：对于EdU检测，在切片上直接进行铜催化的叠氮-炔环加成反应连接荧光探针。

免疫组化染色：对于BrdU，依次滴加抗BrdU一抗、生物素化二抗及辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。

显色与复染：使用DAB等显色底物产生棕色沉淀，随后用苏木精等染料进行细胞核复染。

免疫荧光染色：可使用荧光标记的二抗或直接点击化学荧光标记，实现多色荧光共定位分析。

封片与观察：染色完成后，用中性树胶（明场）或抗淬灭封片剂（荧光）封片，于显微镜下观察分析。

检测仪器设备

石蜡切片机：用于将石蜡包埋的组织块切割成数微米厚的连续薄片。

冰冻切片机：用于在低温下快速切割新鲜或固定后的冰冻组织块，保持抗原活性。

摊片机与烘片机：用于将切割后的组织薄片平整展开并烘烤牢固粘贴于载玻片。

高压锅或微波炉：用于进行热诱导的表位修复，以恢复被固定掩蔽的抗原性。

湿盒：在抗体孵育过程中保持切片湿润，防止试剂蒸发干燥的非特异性结合。

移液器与滴瓶：用于精确加样和各种缓冲液、试剂的滴加操作。

光学显微镜：用于观察DAB显色的明场结果，进行初步形态学评估和图像采集。

荧光显微镜：配备特定激发/发射滤光片组，用于观察和采集EdU/BrdU的荧光信号。

共聚焦激光扫描显微镜：用于获取高分辨率、高对比度的断层荧光图像，并进行三维重建和共定位分析。

全玻片扫描仪：可对整张切片进行高速、自动化的全景扫描和数字化，便于定量分析和存档。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。