分子排阻色谱纯化分析

检测项目

聚合体与片段分析：定量检测蛋白质药物中高分子量聚合体与低分子量片段的含量，是生物药关键质量属性。

纯度测定：评估目标蛋白或高分子样品的单体纯度，是产品放行与质量控制的核心指标。

分子量测定：通过标准曲线法测定蛋白质、多糖或合成高分子的表观分子量或分子量分布。

聚集态分析：监测蛋白质在不同应力条件下（如温度、pH）的聚集行为与动力学。

工艺相关杂质检测：检测纯化工艺中可能残留的宿主细胞蛋白片段或培养基成分。

抗体药物偶联物（ADC）分析：评估ADC药物中裸抗、不同载药量组分及聚集体的分布。

病毒样颗粒（VLP）分析：分析病毒样颗粒的组装完整性与大小均一性。

多糖疫苗表征：测定多糖疫苗的分子大小分布，这与免疫原性密切相关。

配方筛选与稳定性研究：比较不同配方条件下目标分子的聚集趋势，筛选最优稳定剂。

相互作用研究：通过观察洗脱体积变化，分析蛋白质-蛋白质或蛋白质-配体间的弱相互作用。

检测范围

单克隆抗体与融合蛋白：适用于IgG、IgM等多种抗体及Fc融合蛋白的纯度与聚集分析。

重组治疗性蛋白：如胰岛素、生长激素、细胞因子等的质量控制。

疫苗产品：包括多糖疫苗、蛋白亚单位疫苗及病毒载体疫苗的大小排阻分析。

寡核苷酸与质粒DNA：用于分析合成寡核苷酸及质粒DNA的超螺旋、开环和线性构型。

病毒载体与疫苗：如腺相关病毒（AAV）、腺病毒等基因治疗载体的空壳/完整壳粒比率分析。

合成高分子聚合物：如聚苯乙烯、聚环氧乙烷等的分子量分布测定。

天然多糖与肝素：用于测定其分子量分布，关联其生物活性与安全性。

脂质纳米粒（LNP）：评估LNP的粒径分布与聚集状态，尤其在mRNA递送系统中。

蛋白质复合物：分析天然状态下蛋白质复合物的化学计量与组装状态。

聚集体标准品：用于系统适用性测试的蛋白质聚集体标准物质的分析。

检测方法

等度洗脱法：最常用方法，使用恒定组成的流动相进行洗脱，操作简单，重现性好。

多角度激光光散射联用法（SEC-MALS）：结合SEC与MALS，无需标准品即可直接测定绝对分子量与均方根半径。

示差折光检测法（SEC-RI）：通用型浓度检测方法，适用于无紫外吸收的样品如多糖、合成高分子。

紫外/可见光检测法（SEC-UV）：最常用的蛋白质检测方法，利用蛋白质在280nm等处的紫外吸收进行定量。

荧光检测法（SEC-FLD）：具有高选择性和灵敏度，特别适用于复杂基质中低浓度目标蛋白的检测。

动态光散射联用法（SEC-DLS）：在线测定洗脱组分的流体力学半径，提供颗粒大小信息。

粘度检测联用法（SEC-VIS）：与RI检测器联用，可测定特性粘度，用于研究高分子链结构。

电感耦合等离子体质谱联用法（SEC-ICP-MS）：用于元素特异性检测，如分析ADC药物中抗体与小分子毒素的化学计量比。

静态注射法：不经过色谱柱分离，直接对样品池中的样品进行光散射等分析，用于快速筛查。

条件优化方法学：包括流动相离子强度、pH值、有机改性剂比例的优化，以消除非特异性吸附。

检测仪器设备

高效液相色谱系统（HPLC）：提供稳定的流速和压力，是SEC分析的核心输液单元。

超高效液相色谱系统（UHPLC）：使用小粒径填料色谱柱，实现更高分辨率、更快速的SEC分析。

分子排阻色谱柱：核心分离部件，根据填料孔径（如300Å, 150Å）和材质（硅胶、聚合物）选择，适用于不同分子量范围。

多角度激光光散射检测器（MALS）：用于测定绝对分子量、均方根半径及聚集态信息的关键在线检测器。

示差折光检测器（RID）：通用型浓度检测器，响应值与样品浓度成正比，不受生色团影响。

紫外/可见光检测器（UV/Vis）：基于朗伯-比尔定律，对具有紫外吸收的化合物进行高灵敏度检测。

荧光检测器（FLD）：通过特定激发/发射波长对具有荧光特性的分子进行高选择性检测。

动态光散射检测器（DLS）：作为在线或离线附件，测量洗脱峰的流体力学直径分布。

自动进样器：实现样品的高通量、高重现性自动进样，减少人为误差。

柱温箱：精确控制色谱柱温度，确保分离过程的重现性，尤其对温度敏感的蛋白质分析至关重要。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。