蛋白质修饰检测

检测项目

磷酸化修饰检测：鉴定蛋白质上丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基的磷酸化状态与位点，是研究细胞信号通路的核心。

乙酰化修饰检测：检测赖氨酸残基的乙酰化，主要参与基因表达调控和代谢过程。

泛素化与类泛素化修饰检测：鉴定蛋白质是否被泛素或类泛素分子（如SUMO）修饰，关乎蛋白质降解与定位。

甲基化修饰检测：检测赖氨酸或精氨酸残基的甲基化，在组蛋白修饰和转录调控中至关重要。

糖基化修饰检测：分析蛋白质的N-连接或O-连接糖基化，影响蛋白质结构、功能及免疫识别。

脂质修饰检测：鉴定蛋白质的豆蔻酰化、棕榈酰化或异戊二烯化等修饰，决定蛋白质的膜定位。

硝基化修饰检测：检测酪氨酸残基的硝基化，与氧化应激和多种疾病状态相关。

硫酸化修饰检测：鉴定酪氨酸残基的硫酸化，常见于分泌蛋白和膜蛋白，调节蛋白质相互作用。

ADP-核糖基化修饰检测：分析蛋白质被ADP-核糖基团修饰的情况，参与DNA修复和细胞信号传导。

羟基化与羧基化修饰检测：检测脯氨酸、赖氨酸等残基的羟基化或谷氨酸的羧基化，影响胶原蛋白形成和凝血功能。

检测范围

组蛋白修饰：涵盖组蛋白尾部的多种共价修饰，如甲基化、乙酰化等，构成“组蛋白密码”。

信号通路关键蛋白：针对激酶、磷酸酶、转录因子等信号分子的修饰状态进行动态监测。

疾病生物标志物：在肿瘤、神经退行性疾病等患者样本中寻找特异的蛋白质修饰模式作为标志物。

细胞膜与分泌蛋白：重点关注糖基化、脂质修饰等影响蛋白质分泌和膜定位的修饰类型。

代谢酶类：检测参与代谢途径的酶的乙酰化、磷酸化等修饰，以揭示代谢调控机制。

免疫球蛋白与抗体：分析抗体的糖基化模式，这与抗体的效应功能和半衰期密切相关。

细胞骨架蛋白：研究微管蛋白、肌动蛋白等的翻译后修饰对其聚合与功能的调节。

核内调控蛋白：包括转录共激活/共抑制因子等的修饰，调控基因转录活性。

病原体蛋白：研究细菌、病毒蛋白在感染宿主过程中的修饰，以揭示致病机制。

药物靶点蛋白：评估药物对特定靶点蛋白修饰状态的影响，用于药物作用机理与疗效研究。

检测方法

Western Blotting (免疫印迹)：利用修饰特异性抗体进行半定量检测，是基础且广泛应用的方法。

质谱分析 (MS)：尤其是液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)，可高通量鉴定和定量修饰位点。

酶联免疫吸附试验 (ELISA)：使用特异性抗体对样本中的特定修饰蛋白进行定量检测。

免疫沉淀 (IP) 与免疫共沉淀 (Co-IP)：利用抗体富集特定修饰的蛋白或其复合物，用于下游分析。

磷酸化蛋白质组学：基于质谱的专门技术，用于全局性分析细胞或组织中的磷酸化事件。

糖蛋白质组学：采用凝集素富集或化学标记结合质谱的方法，系统研究糖基化修饰。

放射性能量转移 (FRET) 成像：在活细胞内实时监测特定蛋白质修饰的动态变化。

蛋白质芯片技术：将大量蛋白质或抗体点制于芯片上，用于高通量筛选修饰相互作用。

基于抗体/凝集素的亲和纯化：使用针对特定修饰基团的抗体或凝集素直接富集修饰肽段或蛋白。

化学标记与点击化学：通过引入生物正交化学基团，实现对特定类型修饰（如脂质修饰）的选择性标记与富集。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪：如Orbitrap、Q-TOF等，是进行精确修饰位点鉴定和定量的核心设备。

液相色谱仪 (HPLC/UPLC)：与质谱联用，用于复杂肽段混合物的高效分离。

化学发光成像系统：用于Western Blotting结果的灵敏检测和图像采集分析。

多功能酶标仪：用于ELISA、荧光检测等多种基于微孔板的定量分析。

激光共聚焦显微镜：结合FRET探针或特异性荧光抗体，实现修饰的亚细胞定位可视化。

蛋白质纯化系统 (如FPLC)：用于大规模制备和纯化目标蛋白，以供修饰分析。

超声波细胞破碎仪：用于高效裂解细胞、组织样本，释放内含蛋白并保持修饰状态。

离心机 (高速与超速)：用于样本制备过程中的细胞、细胞器分离及蛋白沉淀。

电泳系统：包括SDS-PAGE、等电聚焦等装置，用于蛋白质的分离与初步分析。

生物信息学服务器与软件：配备专业软件（如MaxQuant, Proteome Discoverer）用于处理海量质谱数据，鉴定修饰位点。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。