核糖体蛋白免疫印迹检测

检测项目

核糖体蛋白S6（RPS6）：检测S6蛋白的表达水平，常用于评估mTOR信号通路活性。

核糖体蛋白S6磷酸化（p-RPS6）：特异性检测S6蛋白在Ser235/236或Ser240/244位点的磷酸化修饰。

核糖体蛋白L7a（RPL7A）：检测60S大亚基核心蛋白L7a的表达，作为核糖体生物合成的标志物。

核糖体蛋白S19（RPS19）：检测40S小亚基蛋白S19，其突变与 Diamond-Blackfan 贫血症相关。

核糖体蛋白L5（RPL5）：检测与5S rRNA结合的60S亚基蛋白，参与核糖体组装。

核糖体蛋白S3（RPS3）：检测具有额外DNA修复功能的40S亚基蛋白。

核糖体蛋白L11（RPL11）：检测参与p53通路调控的60S亚基蛋白，响应核糖体应激。

核糖体蛋白S27（RPS27）：检测与泛素融合表达的40S小亚基蛋白。

核糖体蛋白L26（RPL26）：检测60S大亚基蛋白，参与翻译调控和p53激活。

核糖体蛋白P0（RPLP0）：检测核糖体磷蛋白P0，常被用作Western Blot内参蛋白。

检测范围

细胞培养样本：适用于贴壁或悬浮培养的哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞等全细胞裂解液。

动物组织样本：适用于从小鼠、大鼠等模型动物中提取的心、肝、脾、肺、肾、脑等多种组织匀浆液。

植物组织样本：适用于拟南芥、水稻等模式植物的叶片、根、种子等组织的蛋白提取物。

血液样本：适用于分离的外周血单个核细胞或特定血细胞的裂解液。

肿瘤样本：适用于临床手术切除的肿瘤组织或移植瘤模型的蛋白提取物。

亚细胞组分：适用于通过离心分离获得的细胞质、细胞核、线粒体等组分的蛋白样品。

免疫沉淀产物：适用于通过Co-IP或Pull-down实验富集的与核糖体蛋白相互作用的复合物。

翻译后修饰研究：适用于检测核糖体蛋白的磷酸化、乙酰化、甲基化等修饰状态的变化。

药物处理样本：适用于经mTOR抑制剂、蛋白质合成抑制剂等药物处理后的细胞或组织样本。

发育与分化阶段样本：适用于不同胚胎发育阶段、细胞分化时间点的样本，研究核糖体蛋白的动态变化。

检测方法

样本制备与裂解：使用RIPA或NP-40等裂解液，在低温下裂解细胞或组织，并加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂。

蛋白质浓度测定：采用BCA法或Bradford法对提取的总蛋白进行精确定量，确保上样量一致。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据目标蛋白分子量选择合适浓度的凝胶，将变性的蛋白质样品进行分离。

蛋白质转膜：采用湿转或半干转法，将凝胶中分离的蛋白质转移至PVDF或硝酸纤维素膜上。

膜封闭：使用5%脱脂牛奶或BSA的TBST溶液封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景。

一抗孵育：用针对特定核糖体蛋白（如抗-RPS6，抗-p-RPS6）的特异性一抗在4℃下孵育过夜。

二抗孵育：使用与一抗种属匹配的HRP或荧光标记的二抗，在室温下孵育1-2小时。

化学发光显影：若使用HRP二抗，则滴加ECL发光底物，在化学发光成像仪中曝光并采集信号。

荧光显影：若使用荧光二抗，则在特定波长的激光下扫描成像，适用于多重检测。

数据分析与归一化：使用ImageJ等软件分析条带灰度值，并以内参蛋白（如β-Actin, GAPDH, RPLP0）进行归一化处理。

检测仪器设备

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE，分离不同分子量的蛋白质。

电转仪：用于将凝胶中的蛋白质高效转移至固相支持膜上。

精密电子天平：用于精确称量化学试剂、组织样本等。

高速低温离心机：用于快速低温沉淀蛋白质、分离细胞组分等。

涡旋振荡器：用于充分混匀样品和试剂。

微量移液器：用于精确移取微量液体，范围覆盖1μL至1mL。

摇床：用于转膜、封闭、洗膜及抗体孵育过程中的匀速振荡。

化学发光成像系统：核心设备，用于捕获和记录ECL底物发出的荧光信号，并进行图像分析。

荧光扫描成像系统：用于检测和定量荧光标记二抗发出的信号，支持多色成像。

超纯水系统：提供无离子、无核酸酶/蛋白酶的超纯水，用于配制所有溶液，保证实验背景洁净。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。