淋巴细胞毒性功能测试

检测项目

自然杀伤细胞活性：评估NK细胞不经致敏直接杀伤靶细胞（如肿瘤细胞、病毒感染细胞）的天然免疫能力。

细胞毒性T淋巴细胞活性：检测抗原特异性CTL识别并裂解相应靶细胞的适应性免疫杀伤功能。

抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用：评估效应细胞（如NK细胞）通过其Fc受体识别结合在靶细胞上的抗体，进而杀伤靶细胞的能力。

颗粒酶B释放测定：定量检测效应细胞释放的颗粒酶B，该酶是介导靶细胞凋亡的关键细胞毒性颗粒成分。

穿孔素释放测定：定量检测效应细胞释放的穿孔素，该蛋白能在靶细胞膜上形成孔道，导致细胞裂解。

干扰素-γ释放：检测效应细胞（特别是CTL和NK细胞）在杀伤过程中产生的IFN-γ，反映其功能活化状态。

肿瘤坏死因子-α释放：测定效应细胞释放的TNF-α，该因子可通过死亡受体途径诱导靶细胞凋亡。

凋亡靶细胞检测：通过 Annexin V/PI 染色等方法，直接定量被效应细胞诱导发生凋亡的靶细胞比例。

CD107a脱颗粒试验：通过检测效应细胞表面CD107a（LAMP-1）的表达，间接反映其细胞毒性颗粒的脱颗粒与释放活性。

钙离子内流检测：监测效应细胞与靶细胞接触后胞内钙离子浓度的变化，此信号是触发细胞毒性作用的关键早期事件。

检测范围

肿瘤免疫治疗评估：用于评估CAR-T细胞、TCR-T细胞、肿瘤浸润淋巴细胞等过继性免疫疗法的体外杀伤效能。

移植免疫监测：检测受者体内淋巴细胞对供体细胞的杀伤活性，以评估移植排斥风险或移植物抗宿主病。

自身免疫性疾病研究：探究在某些自身免疫病中，淋巴细胞异常细胞毒性功能对自身组织的攻击作用。

病毒感染免疫应答：评估机体针对病毒（如HIV、HJianCe、CMV）感染的特异性CTL反应强度与功能。

原发性免疫缺陷病诊断：用于诊断如家族性噬血细胞综合征等与细胞毒性功能缺陷相关的遗传性疾病。

药物免疫毒性筛查：评估新药（尤其是生物制剂）对淋巴细胞毒性功能的潜在抑制或增强作用。

疫苗效力评价：作为细胞免疫应答的关键指标，用于评价预防性或治疗性疫苗诱导的特异性CTL反应。

NK细胞功能紊乱分析：用于慢性疲劳综合征、复发性流产等可能与NK细胞活性异常相关疾病的研究。

造血干细胞移植后重建：监测患者免疫重建过程中，NK及CTL细胞功能的恢复情况。

生物标志物开发：寻找与临床疗效或预后相关的细胞毒性功能标志物，用于指导个体化治疗。

检测方法

铬-51释放法：经典放射性核素法，用Na2⁵¹CrO₄标记靶细胞，通过检测上清中放射性强度计算杀伤率。

乳酸脱氢酶释放法：非放射性方法，通过检测靶细胞受损后释放至培养上清中的LDH酶活性来量化杀伤。

流式细胞术杀伤 assay：使用荧光染料（如CFSE、CellTrace Violet）标记靶细胞，通过流式细胞仪区分并计数活/死靶细胞比例。

Calcein-AM释放法：用Calcein-AM荧光染料标记靶细胞，效应细胞杀伤导致染料释放，检测上清荧光值计算杀伤活性。

实时细胞分析技术：利用阻抗传感技术无标记、实时动态监测共培养体系中靶细胞的裂解过程。

酶联免疫斑点法：主要用于检测分泌IFN-γ、颗粒酶B等的单个效应细胞频率，反映功能性效应细胞的数目。

多重细胞因子检测：使用 Luminex 或 ELISA 等技术，同时定量检测共培养上清中多种与细胞毒性相关的因子。

显微镜成像分析：借助活细胞成像或高内涵成像系统，可视化并定量分析效应细胞与靶细胞的相互作用及杀伤过程。

报告基因法：将荧光素酶等报告基因导入靶细胞，效应细胞杀伤导致报告基因丢失或表达改变，通过检测信号变化量化杀伤。

细胞内染色流式术：通过破膜固定，对效应细胞内颗粒酶B、穿孔素等进行染色，用流式细胞仪分析其表达水平。

检测仪器设备

流式细胞仪：进行多色荧光分析、计数凋亡/坏死靶细胞、检测CD107a脱颗粒及细胞内因子染色的核心设备。

酶标仪：用于读取LDH法、Calcein-AM法及多种ELISA试剂盒的吸光度或荧光值，进行批量样本检测。

伽马计数器：专门用于检测铬-51释放法等放射性核素实验中样本的γ射线放射性计数。

化学发光/荧光成像系统：用于ELISPOT板、Western blot膜或其它基于膜技术的信号捕获与分析。

实时无标记细胞分析仪：如 xCELLigence 系统，通过微电极板实时监测细胞阻抗变化，动态分析杀伤动力学。

活细胞成像系统：配备环境控制装置的倒置荧光显微镜或共聚焦显微镜，用于长时间动态观察杀伤过程。

高内涵分析系统：自动化显微镜与图像分析软件结合，可对多孔板内细胞的形态、荧光等进行高通量定量分析。

Luminex多重检测系统：基于微球流式或成像原理，可一次性对单一样本中的数十种细胞因子进行定量。

生物安全柜：为所有涉及活细胞操作的步骤提供无菌环境，防止样本污染并保护操作人员安全。

二氧化碳培养箱：为淋巴细胞与靶细胞的共培养提供恒定的温度、湿度和CO₂浓度环境，保证细胞活性。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。