糖肽免疫印迹测试

检测项目

糖基化特异性抗体检测：使用针对特定糖链结构（如高甘露糖型、复杂型、杂合型）的凝集素或单克隆抗体，检测糖肽上的糖基化模式。

O-GlcNAc修饰检测：专门检测蛋白质丝氨酸/苏氨酸残基上的O-连接N-乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）修饰，这是一种重要的动态翻译后修饰。

岩藻糖基化水平检测：定量分析糖肽核心或末端连接的岩藻糖，与炎症和癌症等疾病状态密切相关。

唾液酸化程度分析：评估糖链末端唾液酸残基的含量和连接类型（如α2,3或α2,6连接），影响蛋白质功能和细胞识别。

平分型GlcNAc检测：检测β1,4-连接的N-乙酰葡糖胺是否添加到核心甘露糖上，与多种疾病相关。

特定糖蛋白的糖型分析：针对如甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）等特定蛋白质，分析其糖链结构的异质性。

免疫球蛋白G（IgG）Fc段糖基化：精确分析IgG Fc段N-连接糖链的结构，其变化与自身免疫性疾病和炎症活动度相关。

Tn抗原与STn抗原检测：检测O-连接糖链中异常的Tn（GalNAcα1-O-Ser/Thr）和唾液酸化的STn抗原，是重要的肿瘤标志物。

Lewis抗原表位检测：鉴定如Lewis X、Lewis Y等血型抗原相关的糖链结构在糖肽上的表达。

甘露糖-6-磷酸（M6P）修饰检测：识别溶酶体靶向信号——甘露糖-6-磷酸修饰，用于研究溶酶体贮积症等疾病。

检测范围

血清/血浆样本：用于寻找疾病相关的循环糖蛋白生物标志物，如肝癌中的AFP-L3。

细胞裂解液：分析培养细胞或原代细胞中整体或特定糖蛋白的糖基化状态。

组织提取物：从病理组织（如肿瘤组织）中提取蛋白质，研究组织特异性糖基化改变。

纯化的单克隆抗体：评估治疗性抗体药物的关键质量属性，尤其是Fc段的糖基化。

重组糖蛋白药物：对促红细胞生成素（EPO）、凝血因子等生物制品的糖基化一致性进行质控。

尿液样本：用于某些肾脏疾病或遗传性糖基化障碍（CDG）的筛查和研究。

脑脊液样本：研究与神经系统疾病（如阿尔茨海默病、多发性硬化症）相关的糖蛋白变化。

外泌体与微囊泡：分析这些细胞外囊泡表面携带的糖蛋白，探索其在细胞通讯和疾病中的作用。

植物或微生物来源的糖蛋白：研究不同表达系统产生的糖蛋白的糖链结构差异。

酶解后的糖肽混合物：对经过蛋白酶（如胰蛋白酶）消化后产生的复杂糖肽库进行特异性筛选。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：第一步，根据分子量大小分离蛋白质或糖肽样品。

半干式或湿式电转印：将凝胶中分离的条带转移到固相支持膜（如PVDF膜或硝酸纤维素膜）上。

膜封闭：使用脱脂牛奶或BSA溶液封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景信号。

凝集素探针孵育：使用辣根过氧化物酶（HRP）或生物素标记的凝集素（如Con A、WGA、PHA-L）与膜上糖肽的特异性糖链结合。

特异性抗体孵育：使用针对目标糖链结构（如抗-O-GlcNAc抗体）或目标蛋白质骨架的一抗进行孵育。

二抗孵育：如果一抗未直接标记，则使用酶标或荧光标记的二抗与一抗结合。

化学发光底物显影：加入HRP或AP酶的化学发光底物，在暗室中通过X光胶片或化学发光成像系统捕获信号。

荧光扫描检测：若使用荧光标记的二抗或凝集素，则使用荧光扫描仪进行高灵敏度、宽线性范围的检测。

条带密度定量分析：使用ImageJ等软件对显影条带的灰度值进行定量，比较不同样本间糖基化水平的差异。

膜再生与重探测：使用温和的 stripping 缓冲液洗脱已结合的抗体，以便用另一种探针重新检测同一张膜，进行多重分析。

检测仪器设备

垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE，分离蛋白质/糖肽样品的关键装置。

半干式或槽式转印仪：实现蛋白质/糖肽从凝胶到膜的转移，是免疫印迹的核心步骤设备。

硝酸纤维素膜或PVDF膜：作为固相载体，用于固定转移后的样品并进行后续的探针杂交。

水平摇床：在孵育和洗膜过程中，确保膜与溶液充分、均匀地接触。

化学发光成像系统：高灵敏度地检测和记录化学发光信号，是现代Western blot的主流检测设备。

荧光扫描仪：专门用于检测荧光标记探针的信号，具有定量准确、动态范围宽的优势。

X光胶片及暗盒：传统的化学发光信号记录方式，需在暗室中配合胶片冲洗设备使用。

精密移液器及枪头：用于精确量取样品、试剂、抗体及底物，保证实验的重复性。

恒温孵育箱或加热板：在某些需要特定温度孵育步骤时使用，以优化抗原-抗体结合。

图像分析软件系统：如Image Lab、ImageJ等，用于对捕获的图像进行条带定位、背景扣除和密度定量分析。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。