糖基化异质性测试

检测项目

N-糖基化谱分析：全面鉴定和定量蛋白质上天冬酰胺（Asn）连接的聚糖结构、组成及相对丰度。

O-糖基化谱分析：鉴定和定量蛋白质上丝氨酸（Ser）或苏氨酸（Thr）连接的聚糖结构，常见于粘蛋白等。

糖型相对丰度：测定样品中各种特定糖基化结构（糖型）所占的比例或百分比。

岩藻糖基化水平：定量分析聚糖末端或核心结构上岩藻糖的修饰程度，与抗体ADCC效应相关。

半乳糖基化水平：测定聚糖非还原末端半乳糖的添加程度，影响蛋白质的生物学活性和半衰期。

唾液酸化水平：定量分析聚糖末端唾液酸的含量和连接类型（如α-2,3或α-2,6连接），与蛋白的体内半衰期和抗炎活性相关。

高甘露糖型含量：检测含有多个甘露糖残基的糖型比例，与蛋白质的清除速率密切相关。

聚糖分支度：评估复杂型N-聚糖天线数（如二天线、三天线、四天线），影响蛋白的功能和相互作用。

糖基化位点占有率：测定特定糖基化序列（如N-X-S/T）实际上被糖链修饰的百分比。

电荷异质性：分析由唾液酸化等带电糖基化修饰引起的蛋白质电荷变体分布。

检测范围

治疗性单克隆抗体：如利妥昔单抗、曲妥珠单抗等，其糖基化模式直接影响效应功能、安全性和药代动力学。

重组治疗性蛋白：包括促红细胞生成素（EPO）、凝血因子、酶替代疗法药物等，其活性高度依赖正确的糖基化。

融合蛋白：如依那西普、阿柏西普等，需要分析其Fc段或连接区的糖基化修饰。

血浆蛋白：如免疫球蛋白G（IgG）、α-1抗胰蛋白酶等，其天然糖基化模式与疾病状态相关。

病毒包膜蛋白：如HIV gp120、流感病毒血凝素（HA），其糖基化是免疫逃逸和疫苗设计的关键。

细胞膜表面受体：分析受体蛋白（如EGFR、PD-1）的糖基化如何影响配体结合和信号转导。

生物标志物发现：在疾病（如癌症、炎症）状态下，体液或组织中蛋白质糖基化模式的差异变化。

细胞培养过程监控：监测生物反应器中细胞生产蛋白时，糖基化模式随培养条件（pH、营养、时间）的变化。

生物类似药可比性研究：在开发过程中，与原研药进行全面的糖基化异质性比对，确保质量属性一致。

植物或昆虫表达系统产物：评估非哺乳动物表达系统产生的重组蛋白的糖基化差异（如缺乏唾液酸、含有β-1,2-木糖）。

检测方法

液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）：高分辨率、高灵敏度的核心技术，可用于完整蛋白、肽段和释放聚糖水平的分析。

亲水作用液相色谱（HILIC）：常用于荧光标记后释放聚糖的分离，基于聚糖亲水性差异实现高效分离。

毛细管电泳（CE）：基于电荷和大小分离糖型，特别适用于带电荷的唾液酸化糖型分析和高分辨率分离。

凝集素芯片/阵列：利用多种凝集素对特定糖结构的不同亲和力，实现高通量、快速的糖谱筛选。

凝集素亲和层析/电泳：使用固定化凝集素（如SNA, MAL-II）选择性富集或分离含有特定糖结构的蛋白或聚糖。

多反应监测质谱（MRM-MS）：靶向定量方法，针对已知的特定糖型或糖肽进行高灵敏度、高重复性的绝对或相对定量。

释放聚糖的荧光标记法：使用2-AB、ProA等荧光染料标记从蛋白上酶解释放的聚糖，提高HILIC或CE检测的灵敏度。

糖肽分析：通过蛋白酶切后分析带有聚糖的肽段，可同时获得糖基化位点和该位点糖型信息。

完整蛋白质量数分析：使用高分辨质谱直接测定完整或还原抗体的分子量，评估整体糖基化修饰的宏观异质性。

核磁共振波谱（NMR）：用于解析聚糖的精细结构，包括异头构型（α/β）和环构象，但灵敏度较低。

检测仪器设备

高分辨质谱仪（HRMS）：如Q-TOF、Orbitrap系列，提供精确质量数，用于糖型鉴定和复杂谱图解析。

三重四极杆质谱仪（QQQ-MS）：主要用于靶向定量分析（如MRM），具有极高的灵敏度和定量线性范围。

超高效液相色谱仪（UHPLC）：与质谱联用，提供快速、高效的色谱分离，缩短分析时间并提高分辨率。

毛细管电泳仪（CE）：配备激光诱导荧光（LIF）或质谱检测器，用于高分辨率的糖型分离分析。

荧光检测器：与HILIC或UPLC联用，检测荧光标记的聚糖，灵敏度远超于紫外检测。

凝集素芯片扫描仪：专用干读取凝集素芯片上的荧光信号，实现高通量糖组学筛查。

酶标仪：用于基于凝集素ELISA或其它板式生化法的糖基化水平快速筛选实验。

蛋白质纯化系统：如FPLC、HPLC系统，用于在糖基化分析前对目标蛋白进行分离和纯化。

自动化样品前处理工作站：实现从蛋白变性、酶切、除盐到标记的全流程或部分流程自动化，提高重现性和通量。

核磁共振波谱仪（NMR）：高场NMR用于聚糖结构的详细解析和确认，是结构鉴定的有力工具。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。