反义寡脱氧核苷酸基因沉默效率测试

检测项目

目标mRNA表达水平：通过定量PCR等技术，检测AS-ODN处理后特定靶基因mRNA的丰度变化，是评估沉默效率的直接指标。

目标蛋白表达水平：采用Western Blot、免疫荧光等方法，检测靶基因编码蛋白的表达量，反映基因沉默的最终功能效应。

细胞增殖与活力：通过CCK-8、MTT等实验，评估AS-ODN处理对细胞生长和活性的影响，判断其细胞毒性。

细胞凋亡率：利用流式细胞术（Annexin V/PI染色）检测AS-ODN诱导的细胞凋亡情况，关联其功能效应。

细胞周期分布：分析AS-ODN处理后细胞周期各时相（G0/G1, S, G2/M）的比例变化，评估对细胞周期的干扰。

转染效率评估：使用荧光标记的对照ODN或报告基因系统，量化进入细胞的AS-ODN比例，是效率校正的关键。

脱靶效应筛查：通过转录组测序或特定基因芯片，分析非目标基因的表达变化，评估AS-ODN的特异性。

细胞内定位与稳定性：借助荧光显微镜追踪标记AS-ODN在细胞内的分布与留存时间，评估其代谢稳定性。

半抑制浓度测定：通过设置浓度梯度，计算抑制50%靶基因表达所需的AS-ODN浓度（IC50），评价其效力。

沉默持续时间：在不同时间点（如24h, 48h, 72h）检测沉默效果，评估AS-ODN作用的持久性。

检测范围

体外培养细胞系：适用于各种贴壁或悬浮培养的肿瘤细胞、原代细胞等，是初步筛选与机制研究的主要体系。

原代细胞与干细胞：用于在更接近生理状态的细胞模型中验证AS-ODN的效率与特异性。

三维细胞球体模型：在模拟体内组织结构的3D培养模型中测试，能更好地预测体内效果。

动物模型组织样本：从经AS-ODN处理的动物（如小鼠）中获取靶组织，检测基因和蛋白水平的沉默效果。

血液与体液样本：检测循环肿瘤细胞或特定血细胞中的靶标，或分析血清中因沉默而变化的生物标志物。

不同化学修饰的AS-ODN：评估硫代磷酸酯、吗啉代、锁核酸等不同修饰对沉默效率及稳定性的影响。

不同给药方式的效果：比较脂质体转染、电穿孔、体内注射等不同递送方式下的沉默效率差异。

不同靶基因序列区域：针对同一基因的启动子区、编码区、5‘或3’非翻译区等不同区域设计AS-ODN并比较效率。

药物联用协同效应：评估AS-ODN与化疗药物或其他疗法联用时，对基因沉默及最终疗效的增强作用。

疾病模型验证：在特定的疾病模型（如癌症、炎症、遗传病模型）中全面评估AS-ODN的治疗潜力。

检测方法

实时定量荧光PCR：通过逆转录后对cDNA进行荧光定量扩增，精确测定目标mRNA的相对或绝对表达量。

数字PCR：提供绝对定量，不依赖标准曲线，能更灵敏地检测低丰度mRNA的微小变化。

蛋白质免疫印迹法：利用特异性抗体对靶蛋白进行定性及半定量分析，直观展示蛋白水平的变化。

酶联免疫吸附试验：适用于可分泌至细胞上清或血清中的靶蛋白，进行高通量、定量的检测。

免疫组织化学/免疫荧光：在细胞涂片或组织切片上原位观察靶蛋白的表达水平与亚细胞定位变化。

流式细胞术：快速对大量单个细胞的蛋白表达水平（胞内或膜表面）、凋亡、周期进行多参数定量分析。

高通量测序技术：通过RNA-Seq全面分析转录组变化，是进行脱靶效应筛查和发现新机制的金标准。

报告基因系统：将靶序列克隆至荧光素酶等报告基因下游，通过检测报告基因活性快速评估AS-ODN效率。

核酸酶保护实验：用于验证AS-ODN与靶mRNA的特异性结合及对核糖核酸酶H活性的激活。

显微成像与共聚焦技术：对荧光标记的AS-ODN进行实时活细胞追踪，观察其内化、定位及动态过程。

检测仪器设备

实时荧光定量PCR仪：进行qPCR实验的核心设备，用于精确、高通量地检测基因表达差异。

数字PCR系统：提供超高灵敏度和准确性的核酸绝对定量平台，适用于低丰度靶标或微小差异检测。

蛋白电泳及转印系统：包括电泳槽、电源和湿转/半干转印仪，用于Western Blot实验中的蛋白分离与转移。

化学发光成像系统：捕获Western Blot、ELISA等实验中化学发光或荧光信号，进行蛋白条带定量分析。

酶标仪：用于读取ELISA、MTT/CCK-8等实验的吸光度或荧光值，实现高通量样本检测。

流式细胞仪：对细胞进行多参数、高速、定量的分析与分选，是检测蛋白表达、凋亡、周期的关键设备。

倒置荧光显微镜：观察细胞形态、荧光标记AS-ODN的定位以及免疫荧光染色结果的基础成像设备。

激光共聚焦显微镜：提供高分辨率、光学切片的细胞三维图像，用于精细研究AS-ODN的亚细胞定位及共定位分析。

高通量测序仪：进行转录组测序（RNA-Seq）以全面评估基因沉默效果和脱靶效应的核心大型设备。

细胞能量代谢分析仪：通过实时监测细胞耗氧率和酸化率，间接评估AS-ODN对细胞功能代谢的影响。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。