磷酸化位点质谱解析测试

检测项目

磷酸化肽段鉴定：通过质谱数据搜索，精确鉴定样品中所有携带磷酸化修饰的肽段序列。

磷酸化位点定位：确定磷酸化修饰在肽段序列上的具体氨基酸残基位置（如丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸）。

磷酸化修饰定量分析：采用标记或非标记策略，对不同样品中同一磷酸化位点的修饰丰度进行相对或绝对定量。

磷酸化蛋白质鉴定：基于鉴定的磷酸化肽段，回溯并鉴定其所属的母体蛋白质。

磷酸化动力学研究：在时间序列样本中，监测特定磷酸化位点随刺激或时间变化的修饰水平动态。

磷酸化修饰谱分析：全景式描绘特定样本（如细胞、组织）在特定状态下的所有磷酸化修饰事件集合。

激酶-底物关系推断：通过基序分析和生物信息学方法，根据磷酸化位点序列推测可能的上游作用激酶。

翻译后修饰串扰分析：探究磷酸化与其他修饰（如乙酰化、泛素化）在同一蛋白或通路中的相互作用。

差异磷酸化分析：比较不同实验组（如疾病vs正常，处理vs对照）间磷酸化修饰水平的显著性差异。

功能富集与通路分析：对鉴定到的磷酸化蛋白进行GO、KEGG等生物信息学分析，揭示其涉及的生物学过程和信号通路。

检测范围

细胞裂解液：适用于培养的哺乳动物细胞、植物细胞、微生物细胞等全细胞蛋白质提取物。

组织样本：涵盖动物组织（如脑、肝、肿瘤）、植物组织以及临床病理组织样本。

血清/血浆：用于寻找疾病相关的循环磷酸化蛋白生物标志物。

免疫沉淀/亲和纯化产物：针对特定蛋白、蛋白复合物或特定修饰富集后的样品进行深度分析。

亚细胞器组分：如线粒体、细胞核、膜蛋白等特定细胞器或组分的磷酸化修饰研究。

分泌蛋白组：分析细胞上清或体液中的分泌蛋白和胞外囊泡的磷酸化状态。

激酶反应体系：体外激酶反应产物，用于验证激酶活性及直接底物鉴定。

磷酸化抗体验证样本：为抗体特异性验证提供确凿的质谱定位证据。

古生物或特殊环境样本：经过特殊处理的化石或极端环境生物样本中的修饰蛋白分析。

重组蛋白与药物处理样本：用于药物（尤其是激酶抑制剂）作用机制研究及药物靶点发现。

检测方法

液相色谱-串联质谱法：将复杂肽段混合物经液相色谱分离后，进入串联质谱进行序列与修饰解析的主流方法。

TiO2/MOAC亲和富集法：利用二氧化钛或金属氧化物亲和色谱特异性富集磷酸化肽段，提高检测灵敏度。

IMAC亲和富集法：使用固定化金属离子亲和色谱，通过金属离子与磷酸基团螯合作用富集磷酸化肽段。

SILAC标记定量技术：通过稳定同位素氨基酸体内标记细胞，实现不同状态细胞样本磷酸化的精确定量比较。

TMT/iTRAQ标记定量技术：利用体外等重同位素标签标记肽段，实现多达16个样本的多重并行定量分析。

Label-free非标记定量技术：基于质谱信号强度或谱图计数，无需同位素标记的磷酸化相对定量策略。

PRM/SRM靶向质谱技术：针对已知的特定磷酸化位点，进行高灵敏度、高重复性的靶向验证与绝对定量。

Data-Dependent Acquisition：数据依赖性采集模式，自动选择强度最高的离子进行碎裂，用于大规模发现性分析。

Data-Independent Acquisition：数据非依赖性采集模式，无偏地对所有预设窗口内的离子进行碎裂，提高重现性和定量准确性。

电子转移解离/高能碰撞解离：应用ETD或HCD等互补的碎裂技术，提高磷酸化位点定位的准确性和序列覆盖度。

检测仪器设备

高分辨串联质谱仪：如Q-Exactive系列、Orbitrap Fusion系列，提供高精度母离子和碎片离子质量数测定。

纳升液相色谱系统：与质谱联用，用于低流速、高分离度的肽段在线分离，提升鉴定深度。

高效液相色谱系统：用于样品预处理、肽段分级或高流速分离的常规液相系统。

二氧化钛富集柱/磁珠：用于磷酸化肽段特异性富集的亲和层析材料。

IMAC富集试剂盒：包含固定化Fe3+或Ga3+等离子的预装柱或磁珠试剂盒。

超声波细胞破碎仪：用于有效裂解细胞和组织，提取总蛋白质。

高速低温离心机：用于样本制备过程中的蛋白质沉淀、细胞器分离等步骤。

酶解反应设备：如恒温摇床或水浴锅，用于控制蛋白质胰酶消化的温度和时间。

真空浓缩离心机：用于快速干燥和浓缩肽段样品，以进行后续上样或标记反应。

高性能计算服务器与数据库：运行MaxQuant、Proteome Discoverer等专业软件，进行海量质谱数据的搜索、分析与存储。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。