翻译后修饰定量实验

检测项目

磷酸化修饰定量：对蛋白质丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上磷酸基团的添加进行精确定量，是研究细胞信号转导的核心。

乙酰化修饰定量：定量分析蛋白质赖氨酸残基的乙酰化水平，与基因转录调控和代谢通路密切相关。

泛素化与类泛素化修饰定量：对蛋白质的泛素或SUMO等修饰链进行定量，主要涉及蛋白质降解、DNA修复等过程。

甲基化修饰定量：精确定量赖氨酸或精氨酸残基的单/双/三甲基化，在表观遗传和转录调控中起关键作用。

糖基化修饰定量：对蛋白质N-连接或O-连接糖链的丰度变化进行定量，关乎蛋白质折叠、免疫识别等功能。

脂质化修饰定量：定量分析蛋白质的豆蔻酰化、棕榈酰化等脂质修饰，影响蛋白质的膜定位与信号传导。

硝基化与亚硝基化修饰定量：对酪氨酸硝基化和半胱氨酸亚硝基化进行定量，常用于氧化应激相关研究。

硫酸化修饰定量：定量蛋白质酪氨酸硫酸化修饰，参与细胞间通讯和蛋白质相互作用。

羟基化与羧基化修饰定量：定量分析脯氨酸羟基化、天冬氨酸羧基化等修饰，与胶原蛋白合成、凝血等功能相关。

SUMO化修饰定量：特异性定量小泛素相关修饰物（SUMO）的共价连接，调控蛋白质的核质运输及转录活性。

检测范围

全蛋白质组规模筛选：在无预设目标的情况下，对复杂样本中所有可检测的翻译后修饰进行全局性定量分析。

特定信号通路研究：聚焦于某一特定生物学通路（如MAPK、PI3K-Akt通路）中关键蛋白的修饰动态变化。

亚细胞器修饰组学：针对线粒体、细胞核、高尔基体等特定细胞器内的蛋白质修饰事件进行定位定量研究。

疾病生物标志物发现：通过比较健康与疾病样本，筛选与疾病发生发展相关的特异性修饰位点作为潜在标志物。

药物作用机制研究：评估药物处理前后细胞或组织中蛋白质修饰图谱的变化，阐明药物靶点与作用机制。

特定蛋白复合物分析：对免疫共沉淀或亲和纯化得到的特定蛋白复合物，进行其组成蛋白的修饰状态定量。

翻译后修饰串扰研究：探究不同修饰类型（如磷酸化与乙酰化）在同一蛋白或通路中的相互影响与调控关系。

时间动力学过程监测：在刺激或扰动后的不同时间点取样，定量描绘特定修饰位点的动态变化轨迹。

空间组织差异分析：比较不同组织、器官或肿瘤区域之间蛋白质修饰图谱的差异。

种属间保守性比较：跨物种比较同源蛋白上关键修饰位点的保守性与功能差异。

检测方法

基于质谱的非标记定量（Label-free）：通过比较不同样品间质谱峰强度或谱图计数来定量修饰肽段的丰度，无需同位素标记。

稳定同位素标记氨基酸细胞培养（SILAC）：在细胞培养时使用轻重同位素标记的必需氨基酸，实现体内代谢标记，用于细胞样本的精确比较。

串联质谱标签（TMT/iTRAQ）：使用多种同量异位化学标签对肽段进行体外标记，可实现多达16个样本的多重并行定量分析。

二甲基标记法：一种经济高效的体外化学标记策略，利用甲醛和氰基硼氢化钠对肽段N端和赖氨酸进行轻重标记。

选择性富集结合质谱：采用抗体、固定化金属离子亲和层析（IMAC）或TiO2等方法特异性富集目标修饰肽段，再进行质谱定量分析。

平行反应监测/选择反应监测（PRM/SRM）：基于三重四极杆质谱的目标性定量方法，针对已知修饰位点实现高灵敏度、高重复性的绝对或相对定量。

数据依赖性采集（DDA）

数据非依赖性采集（DIA）：一种无偏的质谱数据采集模式，循环碎裂所有进入质谱的母离子，实现对样品中所有肽段（包括修饰肽段）的系统性定量。

抗体芯片技术：利用固定有特异性抗体的芯片高通量检测已知蛋白的特定修饰水平，通量高但依赖于抗体质量。

Western Blotting定量分析：使用针对特定修饰位点的抗体进行免疫印迹，结合化学发光或荧光成像进行半定量分析。

检测仪器设备

高分辨率轨道阱质谱仪（Orbitrap系列）：以其高分辨率、高质量精度和高灵敏度成为翻译后修饰组学研究的核心平台，如Q Exactive、Orbitrap Fusion系列。

三重四极杆质谱仪（Triple Quadrupole MS）

飞行时间质谱仪（TOF-MS）：如TripleTOF系统，具有高速扫描和高分辨率特性，尤其适合与DIA采集模式联用进行大规模修饰组学分析。

傅里叶变换离子回旋共振质谱仪（FT-ICR MS）：提供极高的质量分辨率和精度，用于最复杂的样品分析和精确质量测定。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。