GTP酶活化原位杂交分析

检测项目

RhoA mRNA原位表达分析：检测细胞骨架调节关键因子RhoA的mRNA在组织切片中的定位与丰度。

Rac1 mRNA原位表达分析：可视化与细胞迁移、膜皱褶形成密切相关的Rac1基因的mRNA表达。

Cdc42 mRNA原位表达分析：定位调控细胞极性建立和微管组装的Cdc42基因的转录本。

GAPs（GTP酶活化蛋白）相关基因检测：分析如p190RhoGAP等负向调控GTP酶活性的蛋白编码基因的表达。

GEFs（鸟苷酸交换因子）相关基因检测：检测如Tiam1、Vav等激活GTP酶的交换因子基因的mRNA分布。

GDIs（鸟苷酸解离抑制因子）相关基因检测：定位抑制GTP酶从膜上解离的因子基因的转录情况。

肿瘤组织中GTP酶信号通路基因表达谱：在肿瘤微环境中，系统性分析多个GTP酶通路相关基因的共定位表达。

发育过程中GTP酶基因时空表达模式：追踪在胚胎或组织发育不同阶段，特定GTP酶基因的表达动态变化。

神经突触相关小GTP酶检测：重点分析如Rab3A等在神经末梢囊泡转运中起关键作用的小GTP酶基因。

炎症信号通路中GTP酶基因检测：研究在炎症反应细胞内，如Rho GTP酶家族成员基因的诱导性表达。

检测范围

石蜡包埋组织切片：适用于临床病理存档的福尔马林固定石蜡包埋样本，进行回顾性研究。

冰冻组织切片：适用于新鲜组织快速冷冻切片，能更好地保存mRNA完整性。

培养细胞爬片或涂片：用于贴壁或悬浮细胞的原位基因表达分析，细胞形态保持良好。

胚胎整体原位杂交（经优化后）：适用于小型模式生物（如小鼠胚胎）整体水平的基因表达定位。

肿瘤组织与癌旁对照组织：比较肿瘤区域与正常区域GTP酶通路基因表达的差异。

心血管疾病组织样本：应用于动脉粥样硬化斑块、心肌肥大等病变组织中相关基因的检测。

神经退行性疾病脑组织：用于阿尔茨海默病、帕金森病等脑切片中特定神经元基因表达研究。

损伤修复与再生组织：如皮肤伤口愈合、肝再生等过程中，细胞运动相关GTP酶基因的动态观察。

植物组织（经方法适配）：经过特定探针设计和预处理，可应用于植物细胞极性生长相关ROP GTP酶的检测。

微生物感染宿主组织：研究病原体感染过程中，宿主细胞骨架重排相关GTP酶基因的表达响应。

检测方法

样本前处理与固定：使用多聚甲醛等固定剂迅速固定组织或细胞，以保存形态并防止RNA降解。

蛋白酶K消化：用蛋白酶K适度消化样本，增加细胞膜通透性，使探针易于进入。

地高辛标记探针制备：通过体外转录合成与目标GTP酶基因mRNA互补的地高辛标记的cRNA探针。

杂交液配制与预杂交：配制含有甲酰胺、盐、载体的杂交液，并进行预杂交以封闭非特异性位点。

过夜杂交：将标记探针与样本在适宜温度（通常37-55℃）下孵育过夜，进行特异性杂交。

严格性洗涤：使用不同浓度的SSC缓冲液在特定温度下洗涤，去除未结合及非特异性结合的探针。

封闭与非免疫血清处理：用羊血清或BSA封闭，减少后续抗体孵育时的非特异性吸附。

抗地高辛抗体孵育：加入碱性磷酸酶（AP）或辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗地高辛抗体进行结合。

显色底物反应：加入NBT/BCIP（用于AP）或DAB（用于HRP）等底物进行显色反应，生成不溶性沉淀。

复染、封片与观察：使用核固红或苏木精等染料复染细胞核，中性树胶封片后于光学显微镜下观察分析。

检测仪器设备

石蜡切片机或冰冻切片机：用于将组织块切割成厚度均一（通常4-10μm）的薄片。

原位杂交专用烘片仪或烤片机：用于将组织切片牢固粘附于经过多聚赖氨酸处理的载玻片上。

恒温干燥箱：用于样本的烘干、固定以及某些步骤的恒温孵育。

精密移液器及无菌枪头：用于精确移取各种试剂、探针和抗体溶液。

原位杂交湿盒：一个密闭的潮湿容器，用于杂交和抗体孵育步骤，防止液体蒸发。

恒温水浴摇床或杂交炉：提供精确的温度控制和温和振荡，用于杂交和洗涤步骤。

水平摇床：用于载玻片在洗涤液中的平稳晃动，确保洗涤充分均匀。

正置光学显微镜及成像系统：核心观察设备，配备明场、暗场及彩色CCD相机，用于结果观察、拍照和分析。

通风橱或化学抽风装置：在处理有毒试剂（如甲酰胺、DAB）时提供安全防护。

-80℃超低温冰箱或-20℃冰箱：用于长期或短期保存制备好的探针、抗体及珍贵样本。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。