抗体依赖性抑制效能测试

检测项目

抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）：评估效应细胞（如NK细胞）通过其Fc受体识别并结合靶细胞表面抗体后，对靶细胞产生的杀伤能力。

抗体依赖性细胞介导的吞噬作用（ADCP）：测定巨噬细胞等吞噬细胞通过Fc受体结合被抗体包被的靶标（如病原体或肿瘤细胞）并将其吞噬清除的效率。

补体依赖性细胞毒作用（CDC）：检测抗体与靶细胞结合后激活补体经典途径，形成膜攻击复合物导致靶细胞裂解的能力。

抗体Fc段与FcγR的结合亲和力：定量分析抗体Fc片段与不同亚型Fcγ受体（如FcγRIIIa, FcγRIIa）的结合强度，这是ADCC/ADCP效能的分子基础。

抗体Fc段糖基化分析：特别是核心岩藻糖基化水平的测定，因为岩藻糖缺失会显著增强抗体与FcγRIIIa的亲和力，从而提升ADCC活性。

效应细胞激活标志物表达：通过检测效应细胞（如NK细胞）表面CD107a、细胞内IFN-γ、TNF-α等分子表达水平，间接评估其被抗体激活的状态。

靶细胞裂解/死亡率：使用染料排除法（如台盼蓝）、乳酸脱氢酶释放法或荧光染料法直接定量被杀伤的靶细胞比例。

信号通路磷酸化水平：分析效应细胞内由Fc受体交联触发的下游关键信号分子（如Syk、ERK）的磷酸化状态，以阐明作用机制。

抗体依赖性呼吸道爆发活性：主要针对中性粒细胞，测定其通过Fc受体结合免疫复合物后产生活性氧（ROS）的能力。

抗体介导的细胞因子释放谱：全面分析在抗体存在下，效应细胞与靶细胞共培养后上清液中多种细胞因子和趋化因子的分泌情况。

检测范围

治疗性单克隆抗体研发：用于评估抗肿瘤、抗病毒及自身免疫病治疗用抗体的临床前效价与作用机制。

疫苗免疫效果评价：检测疫苗接种后诱导产生的抗体是否具备有效的ADCC/ADCP等功能，评估疫苗的保护效力。

传染病研究：研究针对HIV、流感病毒、SARS-CoV-2等病原体的中和抗体与非中和抗体的额外抗病毒效能。

肿瘤免疫治疗：评估针对HER2、CD20、EGFR等靶点的肿瘤治疗性抗体，以及双特异性抗体、抗体偶联药物的效应功能。

自身免疫性疾病：研究病理状态下自身抗体的异常效应功能，或评估治疗用抗炎抗体的Fc功能沉默效果。

生物类似药可比性研究：在功能层面比对生物类似药与原研药在ADCC、CDC等关键效能指标上的一致性。

免疫细胞功能评估：用于评估供体或患者来源的NK细胞、巨噬细胞等效应细胞的天然细胞毒功能状态。

抗体工程化改造优化：通过定点突变或糖基化工程改造抗体的Fc段，并测试其增强或削弱特定效应功能的效果。

临床疗效生物标志物探索：分析患者用药前后抗体效能的变化，或寻找与临床应答相关的ADIE活性阈值。

转基因动物模型验证：在表达人源Fc受体的小鼠等动物模型中，验证治疗性抗体在体内的功能性作用。

检测方法

流式细胞术ADCC/ADCP检测法：使用荧光染料标记靶细胞，与效应细胞及抗体共孵育后，通过流式细胞仪区分并定量靶细胞的裂解或吞噬情况。

乳酸脱氢酶释放法：基于靶细胞被裂解后释放LDH至培养上清的原理，通过酶促反应显色定量杀伤效率，是一种经典的终点法。

铬-51释放法：放射性经典方法，用Na2⁵¹CrO₄标记靶细胞，通过检测上清中放射性强度计算特异性裂解率，灵敏度高但涉及放射性。

报告基因生物发光法：靶细胞转入荧光素酶报告基因，效应细胞表达特定Fc受体，抗体介导二者结合导致靶细胞裂解和荧光素酶释放，通过发光值定量。

Caliper-based 实时细胞分析：利用实时无标记细胞分析仪监测共培养体系中细胞阻抗的变化，动态、连续地反映靶细胞的杀伤过程。

荧光显微镜成像法：通过高内涵成像系统直接观察和定量被吞噬或杀伤的荧光标记靶细胞，提供直观的形态学证据。

表面等离子共振技术：用于精确测定抗体Fc段与重组FcγR蛋白之间的结合动力学参数（如KD, Kon, Koff）。

酶联免疫吸附法糖型分析：使用凝集素或特异性抗体通过ELISA平台检测抗体糖基化模式，特别是岩藻糖水平。

电化学发光免疫分析法：用于高灵敏度地检测共培养上清中由效应细胞释放的多种细胞因子。

Western Blot与磷酸化流式细胞术：用于检测效应细胞内信号通路的蛋白表达及磷酸化水平变化，深入解析功能机制。

检测仪器设备

流式细胞仪：进行多参数ADCC/ADCP检测、效应细胞分型及胞内细胞因子染色的核心设备，具备高速分选功能更佳。

多功能酶标仪：用于读取LDH法、报告基因法、ELISA等检测的吸光度、荧光或化学发光信号，实现高通量筛选。

伽马计数器：专门用于检测⁵¹Cr释放法等放射性检测方法中样品的放射性计数。

实时无标记细胞分析仪：能够实时、动态监测细胞粘附、增殖和杀伤过程中的阻抗变化，提供连续动力学数据。

高内涵成像分析系统：自动化荧光显微镜与图像分析软件的结合，可对ADCP等表型进行自动定量和形态学分析。

表面等离子共振仪：用于实时、无标记地分析生物分子间相互作用，精确测定抗体-FcγR亲和力与动力学。

高效液相色谱仪：特别是联用质谱的HPLC-MS系统，用于对抗体N-糖链进行精细的结构解析和定量。

电化学发光检测系统：提供高灵敏度和宽动态范围的细胞因子等多因子检测平台，适用于低丰度样本分析。

蛋白质印迹系统

恒温CO₂培养箱：为效应细胞与靶细胞的共培养提供稳定、无菌且温湿度、气体浓度恒定的体外环境。

生物安全柜

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。