抑制剂靶向性测试

检测项目

激酶活性抑制率测定：评估抑制剂在特定浓度下对目标激酶催化活性的抑制百分比，是衡量效力的核心指标。

半数抑制浓度测定：测定抑制目标靶点50%活性所需的抑制剂浓度，是量化抑制剂效能的黄金标准。

选择性谱分析：在包含数十至数百个相关靶点的面板中测试抑制剂，评估其对目标靶点相对于其他靶点的选择性。

结合亲和力测定：通过热力学参数直接测量抑制剂与靶点蛋白的结合强度，常用KD值表示。

细胞增殖抑制测试：在细胞水平评估抑制剂对依赖靶点信号通路的细胞增殖的抑制效果，反映细胞活性。

靶点磷酸化水平检测：通过免疫印迹等技术，检测抑制剂处理后细胞内靶点自身或其下游蛋白磷酸化水平的变化。

细胞周期与凋亡分析：评估抑制剂对细胞周期进程的影响及诱导细胞凋亡的能力，揭示其功能后果。

代谢稳定性测试：在肝微粒体或肝细胞模型中评估抑制剂的代谢速率，预测其体内半衰期。

膜通透性评估：通过Caco-2模型或PAMPA实验评估抑制剂穿透生物膜的能力，与口服吸收相关。

血浆蛋白结合率测定：测定抑制剂与血浆蛋白的结合比例，影响其体内游离药物浓度和药效。

检测范围

蛋白激酶家族：涵盖酪氨酸激酶、丝氨酸/苏氨酸激酶等所有主要激酶亚型，是肿瘤靶向治疗的主要领域。

表观遗传调控靶点：包括组蛋白去乙酰化酶、甲基转移酶、去甲基化酶等，用于开发表观遗传药物。

G蛋白偶联受体：针对GPCR家族的激动剂或拮抗剂进行功能性和结合性测试。

离子通道蛋白：评估抑制剂对电压门控或配体门控离子通道功能的调节作用。

蛋白酶与水解酶：如蛋白酶体、组织蛋白酶等，在癌症和免疫疾病中具有重要价值。

核受体家族：包括类固醇激素受体、甲状腺激素受体等，用于内分泌和代谢疾病药物研发。

细胞周期与凋亡相关蛋白：如Bcl-2家族、Caspases等，评估其对细胞命运的影响。

转运蛋白与泵：如ATP结合盒转运蛋白，与多药耐药性相关。

病毒编码的酶与蛋白：针对病毒生命周期关键酶进行抑制测试，用于抗病毒药物开发。

细菌特异性靶点：针对细菌特有的代谢酶或合成通路进行测试，用于新型抗生素筛选。

检测方法

放射性配体结合分析法：使用放射性标记的ATP或配体，直接测量抑制剂与靶点的竞争性结合，灵敏度高。

时间分辨荧光共振能量转移法：利用镧系元素螯合物作为供体，通过能量转移效率变化检测酶活，背景低，均相检测。

荧光偏振法：基于荧光标记配体与靶点结合后偏振度增加原理，快速测量结合亲和力与竞争。

表面等离子共振技术：实时、无标记监测分子间相互作用动力学，直接获取结合速率与解离速率常数。

微量热泳动技术：通过分子结合前后在温度梯度中运动速度的变化，精确测定溶液中的结合亲和力与化学计量比。

酶联免疫吸附测定法：常用于检测细胞裂解物或体系中特定磷酸化蛋白水平的变化，间接反映抑制剂活性。

细胞热位移分析：基于靶点蛋白与抑制剂结合后热稳定性改变的原理，在细胞裂解液或活细胞中验证靶点结合。

高通量筛选与自动化液体处理：利用自动化工作站，在微孔板中对成千上万个化合物进行快速初筛。

基于质谱的活性蛋白质组学分析：使用化学探针在全蛋白质组范围内鉴定和定量小分子抑制剂的直接作用靶点及脱靶效应。

计算机辅助分子对接与模拟：在实验前通过计算模型预测抑制剂与靶点蛋白的结合模式和能量，指导理性设计。

检测仪器设备

多功能酶标仪：具备吸光度、荧光、化学发光、时间分辨荧光、荧光偏振等多种检测模式，是生化检测的核心设备。

表面等离子共振仪：如Biacore系列，用于实时、无标记分析分子间相互作用动力学。

等温滴定量热仪：通过精确测量结合过程中释放或吸收的热量，直接测定结合热力学参数。

微量热泳动仪：用于溶液中分子相互作用的快速、低样品消耗的亲和力测定。

高通量自动化液体处理系统：实现纳升至毫升级的精准、快速液体分装、转移和稀释，保障筛选效率与重复性。

流式细胞仪：用于分析抑制剂处理后细胞的周期分布、凋亡率、表面标志物及磷酸化信号变化。

蛋白质印迹系统：包括电泳、转膜、成像设备，用于检测特定靶点蛋白表达及修饰水平的变化。

实时荧光定量PCR仪：评估抑制剂对下游基因转录水平的影响，验证信号通路抑制效果。

高内涵细胞成像分析系统：自动化获取和分析细胞形态、数量、荧光信号等多参数图像，提供丰富的表型信息。

液相色谱-质谱联用仪：用于药物代谢产物鉴定、定量分析以及基于活性的蛋白质组学研究中探针标记靶点的鉴定。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。