糖基化修饰测试

检测项目

N-糖基化位点鉴定：确定蛋白质上天冬酰胺（Asn）残基上N-连接聚糖的具体附着位点。

O-糖基化位点鉴定：鉴定蛋白质上丝氨酸（Ser）或苏氨酸（Thr）残基上O-连接聚糖的修饰位置。

糖链结构解析：分析聚糖的单糖组成、连接顺序、分支结构及异头构型等精细结构信息。

糖型相对定量：比较不同样本（如疾病与健康）中特定糖基化修饰的相对丰度变化。

糖基化程度分析：测量目标蛋白质上糖基化位点的占据率或整体糖基化水平。

岩藻糖基化检测：特异性检测聚糖末端或核心结构上岩藻糖的修饰情况，与炎症和癌症相关。

唾液酸化检测：分析聚糖末端唾液酸的类型（如Neu5Ac, Neu5Gc）、连接方式（α2,3/α2,6）及含量。

高甘露糖型检测：鉴定和定量主要由甘露糖组成的高甘露糖型N-糖链。

核心岩藻糖基化检测：特异性检测N-糖链核心五糖结构上的岩藻糖修饰，对抗体ADCC效应至关重要。

糖基化异质性分析：评估同一蛋白质位点上所连接的不同糖链结构的种类和分布。

检测范围

治疗性抗体：如单克隆抗体、双特异性抗体，其Fc区糖基化直接影响效应功能与药代动力学。

重组治疗性蛋白：如促红细胞生成素（EPO）、凝血因子等，其糖基化与活性和稳定性密切相关。

血浆/血清蛋白：包括免疫球蛋白、转铁蛋白、脂蛋白等，其糖基化谱可作为疾病生物标志物。

细胞膜蛋白：如受体、通道蛋白、粘附分子等，糖基化参与细胞识别与信号转导。

分泌蛋白：细胞分泌到胞外基质或体液中的蛋白质，通常高度糖基化。

组织与细胞裂解液：从特定组织或细胞系中提取的总蛋白，用于全局糖基化组学分析。

外泌体与囊泡：细胞分泌的纳米级囊泡，其表面蛋白的糖基化具有重要功能。

植物与微生物糖蛋白：研究其特有的糖基化模式，对于农业和工业酶制剂开发有意义。

糖胺聚糖（GAGs）：如肝素、硫酸软骨素等长链多糖，虽非典型糖蛋白，但属于糖基化修饰分析范畴。

游离寡糖与糖肽：从糖蛋白上释放出的聚糖或含有短肽的糖肽片段。

检测方法

液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）：核心高通量技术，用于糖肽、释放的糖链的分离、鉴定和定量。

凝集素芯片：利用固定化凝集素高通量筛查样本中整体糖基化模式或特定糖型。

凝集素印迹（Lectin Blot）：类似于Western Blot，使用标记凝集素检测电泳后膜上糖蛋白的特定糖型。

亲水作用液相色谱（HILIC）：基于亲水性分离释放的荧光标记聚糖，常用于N-糖谱分析。

毛细管电泳（CE）：高分辨率分离技术，特别适用于带电荷的唾液酸化糖链分析。

多维液相色谱（MudPIT）：结合不同分离机理的色谱，用于复杂样本中低丰度糖肽的深度分析。

酶解法释放N-糖链：使用PNGase F酶将N-连接聚糖从蛋白质上完整切下。

化学法释放O-糖链：通过β-消除反应释放O-连接聚糖。

同位素标记定量（如iTRAQ/TMT）：对肽段或糖链进行同位素标记，实现多组间相对定量。

电化学发光免疫分析（ECLIA）：基于特异性抗体或凝集素的高灵敏度定量方法，常用于生物药质控。

检测仪器设备

高分辨率质谱仪：如Q-TOF、Orbitrap系列，提供高质量精度和分辨率，用于精确鉴定糖基化结构。

三重四极杆质谱仪（QQQ）：基于多反应监测（MRM）模式，对目标糖肽/糖链进行高灵敏度、高精确定量。

纳升液相色谱（nano-LC）

高效液相色谱仪（HPLC）：配备荧光或紫外检测器，用于分离和检测标记后的聚糖或糖肽。

毛细管电泳仪（CE）：用于高分辨率分离中性及带电的聚糖，常与激光诱导荧光（LIF）检测器联用。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）：常用于释放聚糖的快速质谱分析，提供分子量信息。

荧光扫描仪

酶标仪

化学发光成像系统

超声波细胞破碎仪

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。