共激活因子招募分析

检测项目

核受体共激活因子招募：检测特定核受体（如雌激素受体、雄激素受体）在配体激活后招募共激活因子的能力。

通用转录因子相互作用：分析基础转录 machinery 组分（如TFIID， Mediator复合物）与激活的转录因子之间的结合。

组蛋白乙酰转移酶活性：测定被招募的共激活因子（如p300/CBP）是否具有或伴随组蛋白乙酰化修饰活性。

组蛋白甲基转移酶活性：检测特定共激活因子（如MLL家族蛋白）介导的组蛋白甲基化修饰事件。

染色质重塑复合物招募：分析转录因子是否能够招募SWI/SNF等染色质重塑复合物以改变核小体结构。

配体依赖性招募分析：比较不同配体（激动剂、拮抗剂）存在下，转录因子招募共激活因子效率的差异。

突变体功能丧失分析：评估转录因子或共激活因子的功能结构域突变对其相互招募能力的影响。

竞争性抑制实验：研究小分子抑制剂或竞争性多肽对特定共激活因子招募过程的干扰作用。

组织特异性共激活因子筛选：在不同细胞来源的核提取物中，筛选与目标转录因子特异性结合的共激活因子。

动力学参数测定：定量分析转录因子与共激活因子相互作用的结合常数和解离常数。

检测范围

类固醇激素受体信号通路：涵盖ER， AR， GR， PR等受体与SRC， p160家族共激活因子的相互作用研究。

非类固醇核受体通路：包括PPAR， RXR， LXR等代谢相关受体与其共激活因子的招募分析。

细胞因子与应激信号通路：研究STAT， NF-κB， p53等转录因子在信号刺激下对共激活因子的招募。

发育与分化调控因子：涵盖MyoD， β-catenin/TCF， Notch intracellular domain等关键发育调控蛋白。

癌基因与抑癌基因产物：分析c-Myc， E2F， BRCA1等蛋白异常招募共激活因子在肿瘤发生中的作用。

表观遗传修饰读写器：研究含有Bromo， Chromo， PHD等结构域的蛋白作为共激活因子的招募过程。

细胞核内受体辅阻遏物转换：检测在配体缺失或存在拮抗剂时，辅阻遏物被置换并由共激活因子取代的动态过程。

病毒编码反式激活蛋白：研究如HIV Tat， HPV E6/E7等病毒蛋白劫持宿主共激活因子的机制。

植物激素信号转录因子：应用于植物学研究，如生长素响应因子ARF对共激活因子的招募。

体外重建的染色质模板：在包含核小体或染色质化DNA的体外系统中进行更接近生理状态的招募分析。

检测方法

Pull-down/ GST融合蛋白沉降：使用GST标记的转录因子结构域与细胞核提取物孵育，下拉结合的共激活因子。

免疫共沉淀：在细胞内过表达或内源条件下，利用抗体沉淀转录因子，通过WB检测其结合的共激活因子。

染色质免疫共沉淀：在活细胞中固定蛋白质-DNA及蛋白质-蛋白质相互作用，检测特定基因组位点上共激活因子的富集。

哺乳动物双杂交实验：将转录因子与DNA结合域融合，共激活因子与转录激活域融合，通过报告基因活性检测相互作用。

荧光共振能量转移：使用荧光蛋白标记的转录因子和共激活因子，在活细胞中实时、定量检测其相互作用和动力学。

表面等离子共振技术：将转录因子固定在生物传感器芯片上，精确测量溶液中共激活因子结合的动力学参数。

等温滴定量热法：通过测量结合过程中释放或吸收的热量，直接测定相互作用的亲和力和热力学参数。

AlphaScreen/ AlphaLISA 均相检测：基于珠状体的近距离化学发光能量转移，实现高通量、免洗的相互作用筛选。

微尺度热泳动：利用分子结合前后在温度梯度场中运动的变化，在溶液中进行快速、低样品消耗的亲和力测定。

生物膜干涉技术：通过检测生物传感器尖端光学层厚度的变化，实时、无标记地监测蛋白质相互作用的结合与解离。

检测仪器设备

蛋白质电泳及转印系统：用于SDS-PAGE分离蛋白质样品及将蛋白转移至PVDF或NC膜上进行免疫检测。

化学发光成像仪：高灵敏度检测Western Blot实验中ECL等底物发出的荧光或化学发光信号。

实时荧光定量PCR仪：在ChIP-qPCR实验中，精确定量免疫沉淀下来的DNA片段中特定序列的丰度。

多功能酶标仪：用于读取哺乳动物双杂交、AlphaScreen等实验的报告基因信号或化学发光信号。

共聚焦荧光显微镜：用于FRET实验，观察活细胞内蛋白质相互作用的亚细胞定位及动态变化。

表面等离子共振仪：如Biacore系列，专门用于无标记、实时分析生物分子相互作用的仪器。

等温滴定量热仪：直接测量生物分子结合过程中微小的热量变化，用于热力学分析。

微尺度热泳动仪：用于快速测定溶液状态下蛋白质、核酸等生物分子的亲和力与结合常数。

生物膜干涉测量系统：如FortéBio Octet系列，提供无标记、实时的高通量分子互作分析平台。

高通量测序仪：用于ChIP-seq实验，对ChIP富集的DNA片段进行全基因组范围的测序分析。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。