项目数量-208
核苷酸提取效率检测
北检院检测中心 | 完成测试：次 | 2026-03-20
本检测系统阐述了核苷酸提取效率检测的核心内容，涵盖关键检测项目、适用范围、主流方法及所需仪器设备。文章旨在为分子生物学、基因组学及临床诊断等领域的研究人员和技术人员提供一份全面的技术参考，以优化实验流程，确保下游分析结果的准确性与可靠性。
注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。
检测项目
总核酸浓度：使用分光光度法或荧光法测定提取所得样本中DNA与RNA的总浓度，是评估提取产量的基础指标。
DNA纯度（A260/A280比值）：通过紫外吸收比值判断DNA样本中蛋白质污染的程度，理想比值约为1.8。
DNA纯度（A260/A230比值）：通过紫外吸收比值评估DNA样本中盐类、有机溶剂或碳水化合物等污染物的残留情况。
RNA完整性指数：通过微流控电泳技术分析RNA的降解程度，常用RIN值表示，数值越高完整性越好。
片段大小分布：利用琼脂糖凝胶电泳或生物分析仪检测核酸片段的长度范围，确认是否与预期一致。
PCR抑制物检测：通过向样本中添加已知量的标准模板并进行PCR扩增，评估提取液中是否存在抑制下游酶反应的物质。
特定基因靶标回收率：使用qPCR定量检测样本中特定目标序列的绝对拷贝数，计算相对于原始样品的回收效率。
微生物基因组DNA提取效率：针对复杂样本中的微生物，评估从细胞壁破裂到DNA纯化全过程的得率。
福尔马林固定石蜡包埋样本提取效率：评估从FFPE这类难处理样本中成功提取可扩增核酸的能力。
细胞游离DNA提取效率与片段谱：专门评估从血浆等体液中提取cfDNA的产量，并分析其片段大小分布特征。
检测范围
全血与血液组分：适用于从全血、血清、血浆中提取基因组DNA、病毒核酸或cfDNA的效率评估。
培养细胞系：涵盖贴壁细胞、悬浮细胞等培养物来源的核酸提取效率检测。
动物组织：包括新鲜、冷冻或固定的肝脏、肌肉、脑组织等各种动物器官组织的核酸提取。
植物组织：适用于叶片、根、种子等植物材料，需考虑多糖多酚去除效率的检测。
微生物样本：包括细菌、真菌、病毒等纯培养物或环境样本中微生物核酸的提取评估。
法医与考古样本：涵盖唾液斑、毛发、骨骼等痕量、降解严重的特殊生物检材。
环境样本：包括土壤、水体、空气滤膜等环境基质中微生物群落DNA的提取效率评价。
食品与饲料样本：用于检测转基因成分、致病微生物或物种来源的核酸提取过程。
临床病理样本：主要指福尔马林固定石蜡包埋组织切片，其核酸提取效率与质量是关键检测对象。
测序文库构建产物：对提取后的核酸进行建库，通过文库浓度、片段分布等间接评估初始提取质量。
检测方法
紫外分光光度法：基于核酸在260nm处的特征吸收峰，快速测定浓度并计算A260/A280及A260/A230纯度比值。
荧光染料法：使用PicoGreen、Qubit RNA BR等特异性荧光染料，通过荧光计定量，灵敏度高且不受常见污染物干扰。
琼脂糖凝胶电泳：通过核酸在电场中的迁移率，直观判断DNA/RNA的完整性、片段大小及有无严重降解。
微流控芯片电泳：使用安捷伦生物分析仪或类似设备，自动化、高分辨率地分析核酸完整性指数和精确片段分布。
实时定量PCR：通过扩增曲线和Ct值，绝对或相对定量特定靶标序列，是评估回收率和抑制物的金标准方法。
数字PCR：提供绝对定量，不依赖标准曲线，能更精准地评估低丰度靶标或复杂背景下的核酸回收效率。
高通量测序：通过对提取产物进行浅层测序，从序列覆盖度、偏好性等宏观角度全面评估提取质量。
酶切效率检测：使用限制性内切酶处理提取的DNA，通过电泳观察酶切是否完全，间接判断污染物残留情况。
加标回收实验：在样本裂解前加入已知量的外源标准品或竞争性内参，全程参与提取过程，用以计算绝对回收率。
内参基因定量法：针对特定样本类型，选用保守的内参基因进行qPCR定量，比较不同提取方法或批次间的相对效率。
检测仪器设备
紫外-可见分光光度计：如NanoDrop系列，用于微量样本的核酸浓度和纯度快速检测。
荧光光度计/微孔板读数仪：如Qubit荧光计、多功能酶标仪，配合特异性荧光染料进行高灵敏度核酸定量。
琼脂糖凝胶电泳系统：包括电泳槽、电源和凝胶成像系统，用于常规的核酸完整性及大小分析。
生物分析仪：如安捷伦2100或4200系统，基于微流控芯片技术提供自动化的核酸完整性及大小精确分析。
实时荧光定量PCR仪：如ABI QuantStudio系列、Bio-Rad CFX系列，用于靶标定量和抑制物检测的核心设备。
数字PCR系统：如Bio-Rad QX200 Droplet Digital PCR系统，提供无需标准曲线的绝对定量分析。
高通量测序仪：如Illumina NovaSeq、MGI DNBSEQ系列，用于从全局角度评估核酸提取质量与适用性。
离心机：包括高速冷冻离心机和微型离心机，是几乎所有核酸提取步骤中分离液固相的关键设备。
涡旋振荡器与旋转混合仪：用于样本和试剂的充分混匀，确保裂解和结合步骤的效率。
自动化核酸提取工作站：如KingFisher、QIAcube等，实现高通量、标准化的提取流程，其性能需定期用标准品检测验证。
检测流程
线上咨询或者拨打咨询电话;
获取样品信息和检测项目;
支付检测费用并签署委托书;
开展实验，获取相关数据资料;
出具检测报告。
上一篇：热导率激光闪射测量
下一篇：可调谐激光晶体热膨胀系数测试
