溶解蛋白纯度分析

检测项目

总蛋白浓度：测定样品中所有蛋白质的总含量，是计算比活性和纯度的基础。

目标蛋白浓度：特异性测定样品中目的重组蛋白或特定蛋白的含量。

蛋白纯度百分比：通过计算目标蛋白占总蛋白的比例，以百分比形式表征样品纯度。

宿主细胞蛋白残留：检测并定量来源于表达宿主（如大肠杆菌、CHO细胞）的非目标蛋白杂质。

核酸残留：测定样品中残留的DNA和RNA含量，是生物制品的关键安全指标。

内毒素含量：检测由革兰氏阴性菌产生的热原物质，确保产品的生物安全性。

蛋白聚集体分析：检测样品中因错误折叠或相互作用形成的二聚体、多聚体及高分子量聚集体。

蛋白片段与降解产物：分析因蛋白酶降解或化学断裂产生的目标蛋白碎片。

电荷异质性：评估因翻译后修饰（如脱酰胺、糖基化）导致的蛋白电荷变体。

生物学活性：通过细胞实验或酶学方法测定目标蛋白的功能活性，是纯度分析的功能性补充。

检测范围

重组治疗性蛋白药物：如单克隆抗体、融合蛋白、细胞因子等生物制品的原液与成品。

疫苗抗原蛋白：用于预防性疫苗或治疗性疫苗的纯化蛋白组分。

诊断试剂用蛋白：用于免疫检测、生化诊断的酶、抗原和抗体等关键原料。

科研用纯化蛋白：用于结构生物学、生化机制研究、相互作用筛选的高纯度蛋白样品。

工业酶制剂：应用于食品、洗涤、纺织等行业的催化用酶产品的纯度监控。

细胞培养上清液：对分泌表达后的培养液进行初步纯度和浓度评估。

层析洗脱峰组分：在线或离线分析蛋白质纯化过程中各步洗脱组分的纯度变化。

制剂处方样品：分析添加了稳定剂、缓冲盐等辅料后成品制剂中的蛋白状态。

稳定性研究样品：在加速或长期稳定性试验中，监测蛋白纯度和降解情况。

包涵体溶解复性液：对从包涵体中溶解并复性后的蛋白进行纯度与聚集状态评估。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：基于分子量分离蛋白质，通过染色评估纯度并观察杂质条带。

反相高效液相色谱：基于蛋白质疏水性差异进行分离，对疏水性变体和小分子杂质灵敏度高。

尺寸排阻色谱：根据流体动力学体积分离蛋白质，是分析聚集体和片段的经典方法。

离子交换色谱：基于蛋白质表面电荷差异进行分离，用于分析电荷异质体。

毛细管电泳：包括CE-SDS和cIEF，提供高分辨率的纯度、分子量和等电点信息。

液相色谱-质谱联用：提供精确分子量信息，用于鉴定目标蛋白序列、修饰及杂质身份。

酶联免疫吸附测定：高灵敏度、特异性地定量宿主细胞蛋白等特定杂质。

紫外-可见分光光度法：通过280nm等特征吸收波长快速测定蛋白质浓度。

动态光散射：快速无损地测定样品中蛋白质的流体动力学半径及粒径分布，评估聚集状态。

肽图分析：通过酶切和LC-MS/MS分析，从肽段水平确认蛋白身份并发现修饰和降解。

检测仪器设备

高效液相色谱仪：搭载不同色谱柱（SEC, IEX, RP），是进行色谱纯度分析的核心设备。

紫外-可见分光光度计：用于快速测定蛋白样品在特定波长下的吸光度以计算浓度。

SDS-PAGE电泳系统：包括制胶器、电泳槽和电源，用于进行凝胶电泳分离与纯度初判。

凝胶成像分析系统：对染色后的凝胶进行图像采集，并通过软件进行条带定量分析。

毛细管电泳仪：实现自动化、高通量的高分辨率CE-SDS和cIEF分析。

质谱仪：特别是与液相联用的LC-MS和LC-MS/MS系统，用于精确质量测定和杂质鉴定。

ELISA酶标仪：用于读取ELISA板的吸光度值，自动化定量特定残留杂质。

动态光散射仪：用于实时监测蛋白质溶液的粒径与聚集状态，样品需求量小。

分析型超速离心机：通过沉降速度法提供绝对、无柱效应的聚集体和片段定量数据。

生物分析仪：如安捷伦Bioanalyzer，利用微流控芯片技术自动化进行蛋白质电泳分析。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。