糖基化产物液相实验

检测项目

单糖组成分析：测定糖基化产物中各种单糖（如甘露糖、半乳糖、岩藻糖等）的种类和摩尔比例。

N-糖链谱分析：对连接在天冬酰胺（Asn）上的N-连接聚糖进行全面的定性与相对定量分析。

O-糖链谱分析：对连接在丝氨酸/苏氨酸（Ser/Thr）上的O-连接聚糖进行鉴定和表征。

糖肽分析：在肽段水平上鉴定糖基化位点及该位点上的聚糖结构，实现位点特异性分析。

唾液酸含量与连接方式：定量测定末端唾液酸含量，并区分其α-2,3与α-2,6等连接方式。

岩藻糖基化水平：定量分析核心岩藻糖或末端岩藻糖的修饰水平，与药物功效相关。

半乳糖基化水平：测定聚糖末端半乳糖的修饰程度，影响抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）。

高甘露糖型比例：定量样品中高甘露糖型N-糖链所占的比例，与蛋白质清除速率相关。

聚糖分支度：评估复杂型N-糖链的分支情况，如二天线、三天线、四天线结构比例。

糖型相对丰度：对样品中所有主要的糖基化修饰形式（糖型）进行相对定量，描绘整体糖基化轮廓。

检测范围

治疗性单克隆抗体：如利妥昔单抗、曲妥珠单抗等，分析其Fc区和Fab区的糖基化修饰。

重组治疗性蛋白：包括促红细胞生成素（EPO）、凝血因子、酶替代疗法药物等。

血浆与血清糖蛋白：如免疫球蛋白G（IgG）、甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）等疾病标志物。

细胞膜表面糖蛋白：从培养细胞或组织中提取的膜蛋白，分析其糖链在细胞识别中的作用。

病毒包膜糖蛋白：如新冠病毒S蛋白、HIV gp120等，研究其糖盾结构与免疫逃逸。

植物多糖与糖缀合物：包括果胶、阿拉伯半乳聚糖蛋白等，分析其结构特征。

食品中的糖基化产物：如美拉德反应产物、乳制品中的糖巨肽、功能寡糖等。

酶解糖肽混合物：经蛋白酶（如胰蛋白酶）消化后产生的含有糖基化位点的肽段混合物。

释放的游离聚糖：通过化学或酶法从蛋白质上释放出来的完整聚糖库。

糖基化代谢中间体：细胞或生物反应过程中产生的核苷酸糖、脂联寡糖等小分子代谢物。

检测方法

亲水作用液相色谱法：基于聚糖的亲水性，使用酰胺柱等固定相分离带有荧光标记的游离聚糖。

反相液相色谱法：利用C18柱分离疏水性差异的糖肽或衍生化后的聚糖，常与质谱联用。

荧光辅助碳水化合物电泳法：通过毛细管电泳或凝胶电泳分离荧光标记聚糖，分辨率高。

弱阴离子交换色谱法：根据聚糖所带电荷（主要因唾液酸）不同进行分离，用于唾液酸化分析。

多孔石墨碳色谱法：利用石墨碳对极性物质强保留的特性，高效分离异构体，尤其适合唾液酸聚糖。

液相色谱-荧光检测法：对经2-AB、ProA等荧光试剂标记的聚糖进行高灵敏度定量分析。

液相色谱-质谱联用法：核心方法，通过LC分离后由质谱提供精确分子量和结构碎片信息。

串联质谱法：采用碰撞诱导解离等技术产生特征碎片离子，用于解析糖链序列和连接方式。

外切糖苷酶顺序消化法：使用一系列具有特定切割位点的外切糖苷酶处理，结合LC-MS推断结构。

同位素标记相对定量法：采用稳定同位素标记试剂处理不同样品，通过LC-MS/MS进行差异糖组学定量。

检测仪器设备

超高效液相色谱仪：提供高压、高分辨率的色谱分离平台，是糖基化产物分析的核心前端设备。

三重四极杆质谱仪：用于目标糖型或糖肽的高灵敏度、高选择性定量分析（MRM模式）。

四极杆-飞行时间质谱仪：提供高分辨率和精确质量数测定，适合未知糖型的鉴定和全局分析。

线性离子阱-轨道阱组合质谱仪：兼具高分辨率、高质量精度和多级碎裂能力，是深度糖组学的利器。

荧光检测器：连接在HPLC系统后，用于检测经荧光标记的聚糖，灵敏度极高。

在线脱盐装置/纳流液相系统：用于纳升级别液相分离，与质谱联用时可极大提高离子化效率和灵敏度。

自动样品制备工作站：实现从蛋白质变性、酶解到纯化的自动化操作，提高通量和重复性。

真空离心浓缩仪：用于快速浓缩或干燥微量液体样品，是样品前处理的关键设备。

96孔板格式固相萃取装置：用于高通量纯化和富集酶解后的糖肽或标记后的聚糖。

数据处理软件平台：如Byonic、GlycoWorkbench、Skyline等，专门用于糖质谱数据的解析、鉴定和定量。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。