凝胶过滤色谱分离试验

检测项目

蛋白质纯化：从复杂混合物（如细胞裂解液）中分离目标蛋白质，去除其他杂蛋白。

分子量测定：通过与已知分子量的标准品对比，估算未知蛋白或聚合物的表观分子量。

脱盐与缓冲液置换：将样品从高盐浓度的缓冲液中转移到低盐或目标缓冲液中。

寡聚体分析：检测蛋白质或多肽的寡聚状态，如区分单体、二聚体或多聚体。

抗体片段分离：分离完整的抗体与Fab、Fc等抗体片段。

核酸片段分级：按链长分离不同大小的DNA或RNA片段。

多糖分级：根据聚合度分离不同分子量的多糖组分。

聚合物表征：分析合成聚合物或天然聚合物的分子量分布。

复合物解离研究：分析蛋白质-蛋白质或蛋白质-核酸复合物的组成与稳定性。

样品澄清与预处理：作为下游精细纯化（如离子交换色谱）前的预处理步骤。

检测范围

生物制药：单克隆抗体、疫苗、重组蛋白等生物制品的纯化与质控。

基础生命科学研究：蛋白质组学、结构生物学中样品的制备与分离。

临床诊断：分离血清中的特定蛋白（如免疫球蛋白）用于疾病标志物分析。

食品科学：分析食品中的蛋白质、酶或功能性多糖的组成与分子量。

环境监测：分离和检测水或土壤样品中的天然有机大分子。

材料科学：表征水溶性高分子材料的分子量分布及均一性。

法医学：对生物检材中的DNA或蛋白质进行初步分离。

酶学研究：纯化酶制剂并研究其寡聚形式与活性的关系。

疫苗开发：分离病毒样颗粒或抗原-佐剂复合物。

教学实验：作为生物化学与分子生物学课程的经典教学实验内容。

检测方法

柱平衡：使用至少3-5个柱体积的流动相平衡色谱柱，直至基线稳定。

样品制备：将样品溶解或稀释于流动相中，并通过离心或过滤去除不溶物。

上样：使用进样环或样品泵将确定体积的样品加载到色谱柱顶端。

等度洗脱：使用恒定的流动相（通常为缓冲盐溶液）进行洗脱，无梯度变化。

流速控制：根据柱规格和填料类型，设置并保持恒定的低流速以获得最佳分辨率。

在线检测：利用紫外检测器在280nm（蛋白质）或260nm（核酸）波长下实时监测洗脱峰。

分部收集：根据检测信号或时间，自动收集流出的洗脱液组分。

标准曲线绘制：使用一系列已知分子量的标准蛋白运行，绘制保留体积对数值与分子量对数值的标准曲线。

数据分析：通过色谱工作站分析峰形、保留时间/体积，计算样品分子量或纯度。

柱清洗与保存：实验结束后，用纯水冲洗去除盐分，并用含抗菌剂的保存液冲洗后妥善保存。

检测仪器设备

凝胶过滤色谱柱：核心部件，内装葡聚糖（Sephadex）、琼脂糖（Sepharose）或硅胶等填料。

液相色谱系统：提供稳定流速和压力的泵系统，驱动流动相和样品通过色谱柱。

自动进样器：实现样品的高精度、自动化上样，提高重复性和通量。

紫外-可见光检测器：最常用的在线检测器，用于检测具有紫外吸收的生物大分子。

示差折光检测器：通用型检测器，用于检测无紫外吸收的样品（如某些多糖）。

多角度光散射检测器：与SEC联用，可直接、绝对地测定大分子的分子量和大小。

分部收集器：自动收集经色谱柱分离后的洗脱液组分，用于后续分析或使用。

色谱工作站/数据系统：控制仪器运行，采集、处理和分析色谱数据。

脱气机：在线去除流动相中的溶解气体，防止在泵和柱内产生气泡干扰检测。

恒温箱/柱温箱：控制色谱柱温度，确保分离过程的重现性，尤其对温度敏感样品至关重要。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。