肺泡灌洗液半乳甘露聚糖试验

检测项目

半乳甘露聚糖抗原检测：核心检测项目，旨在检测肺泡灌洗液样本中是否存在曲霉菌细胞壁成分半乳甘露聚糖。

样本预处理：对肺泡灌洗液样本进行离心、加热等处理，以释放抗原并灭活干扰物质。

双抗体夹心酶联免疫吸附法：采用的标准免疫学方法，利用特异性单克隆抗体捕获和检测GM抗原。

吸光度值测定：通过酶标仪读取反应后的吸光度值，该值与样本中GM抗原浓度相关。

光密度指数计算：将样本吸光度值与阈值对照的比值计算为ODI指数或GMI指数，用于结果判读。

阈值设定与结果判读：通常设定一个特定的ODI临界值（如0.5或1.0），高于此值视为阳性。

质量控制检测：包括阴性对照、阳性对照和阈值对照，确保每次检测的准确性和可靠性。

临界值附近样本复测：对于ODI值在临界值附近的样本，需进行重复检测以确认结果。

动态监测：对高危患者进行系列样本检测，观察GMI指数的动态变化，辅助诊断和疗效评估。

联合检测分析：结合血清GM试验、真菌培养、影像学及临床表现进行综合诊断。

检测范围

侵袭性肺曲霉病：主要应用于免疫功能严重低下患者（如血液肿瘤、移植患者）疑似IPA的诊断。

肺曲霉菌球：对慢性空洞型曲霉病（曲霉菌球）的辅助诊断价值有限，通常不推荐作为常规检测。

过敏性支气管肺曲霉病：ABPA的诊断主要依赖其他指标（如特异性IgE、嗜酸性粒细胞），BALF-GM检测非首选。

慢性坏死性肺曲霉病：可用于此类亚急性侵袭性感染的辅助诊断。

非曲霉菌属真菌感染：与某些毛霉菌、青霉菌、组织胞浆菌等存在交叉反应，可提供非特异性提示。

抗真菌治疗疗效监测：系列检测中GMI指数的下降可能提示治疗有效。

肺部阴影的鉴别诊断：用于鉴别感染性与非感染性（如肿瘤、出血）肺部阴影。

经验性抗真菌治疗的指导：阳性结果可为启动或调整目标性抗真菌治疗提供依据。

器官移植受者感染筛查：特别是肺移植和造血干细胞移植后肺部并发症的鉴别。

重症监护病房患者：用于ICU中非中性粒细胞减少患者疑似真菌性肺炎的评估。

检测方法

支气管肺泡灌洗术：通过纤维支气管镜向肺泡内注入无菌生理盐水并回抽，获取BALF样本。

样本采集与转运：使用无菌容器收集BALF，尽快送检，若延迟需在2-8℃冷藏保存。

样本前处理：通常将BALF离心取上清，并可能进行加热煮沸处理（如100℃, 3分钟）以暴露抗原。

试剂盒复温：将检测试剂盒的所有组分在使用前恢复至室温。

微孔板加样：向包被有抗GM单克隆抗体的微孔板中加入处理后的样本和对照品。

孵育与洗涤：在特定温度和时间下孵育，使抗原抗体结合，然后洗涤去除未结合物质。

酶标抗体添加：加入辣根过氧化物酶标记的另一株抗GM单克隆抗体，形成“夹心”复合物。

显色反应：加入四甲基联苯胺等底物溶液，酶催化底物产生蓝色产物。

终止反应：加入硫酸等终止液，使蓝色转变为黄色。

读数与计算：用酶标仪在450nm（参考波长630nm）读取吸光度，计算样本的GMI值。

检测仪器设备

生物安全柜：用于样本前处理等操作，保护操作人员和环境免受潜在生物危害。

低速离心机：用于肺泡灌洗液样本的离心，分离细胞和上清液。

涡旋混合器：用于充分混匀样本、试剂，确保反应均一性。

恒温水浴箱或金属浴：用于样本的加热处理（如煮沸步骤），以释放抗原。

微量移液器及吸头：精确移取样本、试剂和对照品的关键工具，需定期校准。

酶标仪：核心读数设备，用于测量微孔板各孔在特定波长下的吸光度值。

洗板机：自动完成微孔板的洗涤步骤，提高洗涤效率的一致性和均一性。

恒温孵育箱：为抗原抗体反应提供恒定且适宜的温度环境（如37℃）。

试剂盒配套微孔板：已预包被捕获抗体的96孔板，是反应的固相载体。

数据处理系统（LIS）与电脑：用于接收酶标仪数据，计算GMI指数，并生成和存储检测报告。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。