抗氧化能力ORAC法评估

检测项目

总抗氧化能力（ORAC值）：评估样品清除过氧自由基（ROO•）的整体能力，以Trolox当量表示，是ORAC法的核心指标。

水溶性抗氧化成分：主要检测样品中溶于水的抗氧化物质，如维生素C、多酚、黄酮类化合物的自由基清除能力。

脂溶性抗氧化成分：评估样品中溶于脂质的抗氧化物质，如维生素E、类胡萝卜素、辅酶Q10等的抗氧化效能。

过氧自由基清除活性：直接测定样品对由AAPH热分解产生的过氧自由基的淬灭速率和程度。

抗氧化反应动力学曲线：记录荧光衰减全过程，分析样品抗氧化的延迟时间、反应速率等动力学参数。

抗氧化保护因子：通过计算荧光衰减曲线下净保护面积（AUC），量化样品提供的抗氧化保护程度。

Trolox当量浓度：以水溶性维生素E类似物Trolox为标准品，将样品的抗氧化能力换算为标准物质的等效浓度。

抗氧化成分协同效应：评估样品中多种抗氧化物质混合后，其总效应是相加、协同还是拮抗。

血浆/血清抗氧化能力：专门用于生物样本，评估血液样本抵抗过氧自由基氧化损伤的潜在能力。

细胞抗氧化活性（CAA）关联指标：作为体外化学法的补充，其ORAC值可为细胞水平的抗氧化评估提供参考依据。

检测范围

水果与蔬菜及其制品：如浆果、柑橘、绿茶、菠菜等，评估其天然植物化学物的抗氧化强度。

功能性食品与保健品：包括提取物（葡萄籽、松树皮）、营养补充剂、中草药配方等产品的功效成分鉴定。

食用油与脂肪：评估不同植物油（如橄榄油、核桃油）的氧化稳定性及其中天然抗氧化物的含量。

饮料：如果汁、葡萄酒、啤酒、咖啡及各种植物饮料的抗氧化等级评定。

化妆品原料与成品：测试如维生素C衍生物、白藜芦醇、艾地苯醌等活性成分的体外抗氧化效能。

药品与医药原料：用于筛选和评估具有潜在抗氧化作用的药物先导化合物或活性成分。

生物体液：包括人体或动物的血浆、血清、尿液，用于营养学或病理生理学研究。

谷物与豆类：评估全麦、糙米、豆类等食品中多酚和膳食纤维的抗氧化贡献。

香辛料与草本植物：如姜黄、肉桂、迷迭香等，量化其高浓度抗氧化成分的活性。

食品包装材料浸出物：评估从包装迁移到食品中的物质是否具有抗氧化性或潜在的促氧化风险。

检测方法

样品前处理与提取：根据样品性质，采用水提、有机溶剂萃取或酸水解等方法，分离水溶性和脂溶性抗氧化成分。

荧光探针（FL）标记：使用荧光素（FL）或二氯荧光素（DCFH）作为荧光探针，其氧化会导致荧光淬灭。

自由基生成剂添加：在反应体系中加入2,2'-偶氮二（2-甲基丙基咪）二盐酸盐（AAPH），在37°C恒温下均匀产生过氧自由基。

反应体系孵育：将样品、荧光探针和自由基生成剂在磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中混合，置于恒温孔板中开始反应。

荧光强度实时监测：使用荧光酶标仪，在激发波长485 nm、发射波长520 nm处，每1-5分钟连续监测荧光强度变化。

标准曲线制备：使用不同浓度的Trolox标准溶液进行同样操作，建立荧光衰减曲线下净保护面积（AUC）与浓度的标准曲线。

荧光衰减曲线分析：绘制荧光强度随时间变化的曲线，计算样品存在下的曲线与空白对照曲线之间的净面积差（ΔAUC）。

ORAC值计算：根据样品ΔAUC与Trolox标准曲线的线性关系，计算样品抗氧化能力相当于多少微摩尔的Trolox当量（μmol TE/g或μmol TE/mL）。

方法验证与质量控制：通过测定精密度、准确度、回收率及使用标准参考物质（如槲皮素）对方法进行验证。

数据标准化与报告：将结果以每单位质量或体积的Trolox当量进行标准化，并出具包含检测条件、结果和单位的完整报告。

检测仪器设备

荧光酶标仪：核心设备，具备温控功能，可对96或384孔板进行高通量、实时荧光信号检测。

多功能酶标仪：集成荧光、吸光度和化学发光检测模式，可兼容ORAC及其他抗氧化检测方法。

精密电子天平：用于准确称量微量样品和标准品，精度通常要求达到0.0001g。

pH计：用于精确配制和校准反应所需的磷酸盐缓冲液，确保反应在生理pH（7.4）下进行。

高速离心机：用于样品前处理中分离不溶性物质，获取澄清的上清液用于检测。

超声波细胞破碎仪/提取仪：用于高效提取固体样品中的抗氧化成分，提高提取效率。

涡旋混合器：用于快速混匀微量反应液，确保样品、探针和自由基生成剂均匀接触。

微量移液器及枪头：用于精确移取微升级别的样品、试剂和标准溶液，保证加样准确性。

恒温水浴锅或干浴器：用于在样品前处理或试剂预热过程中提供稳定的温度环境。

超纯水系统：提供电阻率18.2 MΩ·cm的超纯水，用于配制所有缓冲液和试剂，避免杂质干扰。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。